高效液相色谱-质谱联用法测定槟榔食品中槟榔碱含量

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1、高效液相色谱/质谱联用法测定槟榔食品中槟榔碱含量【摘要】目的建立高效液相色谱-紫外-电喷雾质谱（HPLC-UV-ESI/MS）联用测定槟榔食品中槟榔碱的方法。方法以甲醇和0．1%三乙胺水溶液作流动相,在反相C18(5μm,250mm×4．6mm)柱上梯度淋洗,以质谱定性,紫外定量进行检测。结果在0．2～20μg/ml内峰面积和浓度呈良好的线性关系。结论该方法抗干扰能力强,可以快速、准确地测定槟榔食品中的槟榔碱。【关键词】槟榔;槟榔碱;色谱法；高压液相;光谱分析；质量【关键词】Determinationofarecolineinbetelnutfoo

2、dsbyhighperformanceliquidchromatography/electrospraymassspectrometryWENKai-qi．VocationalTechnicalCollege，YongzhouHunanProvinceYongzhou425006，China【Abstract】ObjectiveAmethodfordeterminingarecolineinbetelnutfoodsbyonlineHPLC-UV-ESI/MSwasestablished．MethodsTheseparationwasoperate

3、donananalyticalspherigelC18column(5μm,250mm×4．6mm)withacetonitrile:water(containing0．1%triethylamine)asmobile6phase．ResultsGoodlinearitybetweenpeakareasandconcentrationswasobtainedwithintherangeof0．2-20μg/ml．ConclusionThemethodissimpleandcandeterminearecolineinbetelnutfoodsacc

4、urately．【Keywords】Betelnut；Arecoline；Chromatography;Highpressureliquid；Spectrumanalysis;Mass槟榔的主要作用是由槟榔碱的功效体现的，一定量的槟榔碱能使人产生兴奋发热作用,像烟草的尼古丁一样,给人以劲头和生理满足感。判断槟榔质量的好坏主要是槟榔碱的含量和纤维质量的优劣。目前，槟榔中槟榔碱含量的测定，通常采用滴定法测定槟榔中总生物碱的含量来代替[1]，这种方法不能准确测定槟榔碱的含量。而薄层扫描法[2]、毛细管电泳法[3]、光度法[4]、高效阳离子交换色谱法[5]

5、也有报道。本文建立了测定槟榔碱含量的高效液相色谱/质谱联用法。1材料与方法1．1仪器与试剂Waters2695分离单元、Waters2487双波长检测器、WatersZQ2000质谱检测器(Waters公司，美国)；色谱纯甲醇（湖南化工研究院精细化工研究所）、三乙胺（上海三浦化工有限公司）；含量＞99%(HPLC)槟榔碱标准品(本实验自制,经NMR、IR结构认证)6。本文中配试剂所用水都为双重纯水，其他试剂均为分析纯试剂。1．2液相色谱-质谱条件色谱柱：SpherigelC18，(250mm×4．6mm，5mm大连江申)，流动相：甲醇+水溶液（0．

6、02mol/LKH2PO4-H3PO4的缓冲溶液和体积约为1．4ml三乙胺；H3PO4的作用主要是调节溶液pH=3，每次水溶液均以1000ml�配置而成）=10+90（体积比），进样前柱子用流动相平衡20min；流速：1ml/min；检测波长：215nm；柱温：室温（25℃）；进样量：10μl。1．3质谱条件：用电喷雾离子化正离子采集模式（ESI+），m/z范围：180～600amu，毛细管电压：3．5kV，锥孔电压:20V,萃取电压5．0V,源温度:105℃,脱溶剂温度:250℃,脱溶剂气:300L/h,锥孔反吹气:50L/h。2方法与结果2．1

7、提取条件的考察2．1．1提取方法的选择根据相似相容原理，有机溶剂提取生物碱是一种比较方便快捷的方法，在选择有机溶剂时，以提取效率和容易分离为主要标准。本实验考察了用水、乙醇、乙醚三种溶媒，比较其提取情况。结果乙醚提取效率非常低；水、乙醇提取的杂质太多，浓缩、净化存在较大的困难；用无水乙醚作为其提取溶剂，在提取过程中加入适量的浓氨水可使槟榔内部纤维或木质素润胀，以便于提取。并且提取率高、溶液相对较纯，故选用氨性乙醚超声提取。62．1．2提取过程中槟榔碱稳定性的考察本实验取样品分别在不同时间段测得的峰面积，得到时间与峰面积的稳定性实验如图1。图1结果说

8、明，槟榔碱对于短时间内在乙醚溶液中的稳定性比较好，随着时间延长稳定性有稍微有下降趋势，这可能跟氨的挥发、碱性下降相关，也说