超高效液相色谱-串联质谱法测定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量

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1、礴河南畜牧兽医综合版2009年(第30卷)第4期超高效液相色谱一串联质谱法测定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量方忠意，刘素梅，宋志超，谭旭信，陈蔷，杜红鸽，朱红继(河南省畜产品质量监测检验中心，河南郑州450008)摘要：该试验建立了使用超高效液相色谱一串联四极杆质谱测定原料乳和奶粉中三聚氰胺含量的检测方法用三氯乙酸溶液和乙酸铅提取．提取液经MCX固相萃取柱净化后用UPLC—MS—MS进行检测。色谱条件：CAPCELLPAKCR1：4柱(2．0mmX100mmi．d．，5m)，流动相：乙腈一0．01mol／L乙酸铵溶液，梯度洗脱流速O．3m

2、l／min采用正离子模式的电喷雾质谱检测．以一级质谱得到的准分子离子m／z126．8作为母离子，进行碰撞诱导解离(CID)二级质谱(MS2)分析，选择母离子和MS2的碎片离子m／z84．9、67．8定性确证，提取m／z84．9离子质量色谱峰面积定量。基质标准线性范围为O．01~1．00~g／rnl，检出限10Ixg／kg(S／N=10)，原料乳回收率为82．4％~97．8％．奶粉回收率为80．7％~95．7％。关键词：三聚氰胺；LC—MS—MS；原料乳；奶粉中图分类号：$851．34+7．5文献标识码：B文章编号：1004—5090(2

3、009)04—0007—03三聚氰胺(melamine)简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜1．2．2质谱条件离子源ESI(+)；毛细管电压3．0kV；锥胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，是一种重要的氮杂环有机化工原孔电压30V：离子源温度110℃；脱溶剂气温度400~C；脱料

4、l_使用常用的粗蛋白测定方法“凯氏定氮法”只能测出溶剂气流量600L／h：锥孔反吹气流量50I／h第一重四极样品的含氮量．不能鉴定是有机氮还是无机氮。由于三聚氰杆和第二重四极杆的低端分辨率及高端分辨率均为15V：胺无色无味，含氮比例为66％，易于生产和购买，成本低，添锥孔电压和

5、碰撞能量见表2检测方式为多反应监测加了三聚氰胺的食品用“凯氏定氮法”可测出较高的蛋白含(MRM)扫描模式，其参数见表2。量．从感官上无法鉴别．因而常被不法分子添加进食品和动表2多反应监测扫描模式的参数物饲料中冒充蛋白质大量试验研究表明．哺乳动物长期摄Parention(m／z)Dauterionm／z)Conevoltage(eV)Collisionenergy(eV)人大量的三聚氰胺会造成肾脏损伤[2,33．2007年3月发生于美国的宠物中毒死亡事件FDA调查结果认定是中国输入的小麦蛋白粉和大米浓缩物里含有三聚氰胺．2008年9月1．

6、3溶液的配制份国内三鹿奶粉事件的罪魁祸首也是三聚氰胺。1．3．1标准溶液的配制准确称取三聚氰胺对照品50mg1材料与方法于50ml容量瓶中。加20％(V／V)甲醇溶液超声溶解，放冷1．1仪器与试剂至室温后定容．配制成含三聚氰胺1mg／ml的标准贮备WatersACQUITYUPLC超高效液相色谱仪：Waters液．4℃保存。MieromassQuattroPremierXE三重四极杆质谱仪：配电喷雾l_3．2提取液的配制取480ml10L三氯乙酸溶液，加离子源(ESI)；Waters固相萃取装置；梅特勒320型酸度计。入20ml22g／

7、L乙酸铅溶液，混匀，临用前配制。WatersOasisMCX固相萃取小柱(3ml，60mg)：三聚1．4样品的提取氰胺对照品：乙腈、甲酸为色谱纯，其余试剂均为分析纯．1．4．1原料乳的提取方法准确量取2ml原料乳于50ml实验室用一级水由Millipore—Q超纯水系统制备。圆底离心管中，准确加入18m1提取液，涡动30s，超声201．2仪器条件min，15000r／min离心10min，准确移取10ml上清液备用。1．2．1液相色谱条件流动相：溶剂A为乙腈．溶剂B为如果上层溶液浑浊．可用快速滤纸过滤．取10ml滤液备O．01mol／L

8、乙酸铵溶液(pH值=4．4)，梯度洗脱，洗脱程序用。见表1。柱温3OqC，进样量l0。1．4．2奶粉的提取方法准确称取2g奶粉于50ml圆底表1梯度洗脱程序离心管中，准确加入20ml提取液．涡动30S。超声20min，15000dmin离心10min．准确移取10ml上清液备用．如果上层溶液浑浊，可用快速滤纸过滤，取1Oml滤液备用1．5净化分别用3Tl1l甲醇、3ml水活化混合型阳离子交换固相萃取柱，将1．4．1或1．4．2所得10ml提取液过柱．控制过·7·2009年(第30卷)第4期综合版河南畜牧兽医柱速度在1mUmin以内。再分

9、别用3ml水和3ml甲醇洗需要选择合适的色谱柱。该试验在研究过程中．考察了涤混合型阳离子交换固相萃取柱．抽干后用3ml5％氨化Waters公司的ACQUITYUPLCTMBEHHILIC柱f2．1ram~甲