高效液相制备色谱的设备进展及应用.ppt

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1、高效液相制备色谱的设备进展及应用2021/10/22021/10/2目录1液体制备色谱4展望2高效液相制备色谱柱设备应用32021/10/21液相色谱是将分离填料填装在色谱柱内，以液体流动相进行洗脱，利用药物不同活性成分与填料相互作用力的差异进行分离。输液系统进样系统分离系统检测系统数据处理系统高压输液泵在线脱气装置概念基本装置液体制备色谱2021/10/2分类两种模式，一种是在柱上方加压，另一种是在柱下方减压。在低压制备色谱中使用的是颗粒较大的填料，因此其分辨率是有限的。利用恒流泵抽送流动相，带着样品流经色谱柱，实现对样品的分离。其色谱柱一般是由耐压的强化玻璃制成，填

2、料颗粒大小比低压制备色谱所用填料小，分离效率更高。高压液相色谱低压制备色谱中压制备色谱利用更细的高效填料进行分离的，具有高柱效、高流速、分离时间短的特点。与经典液相色谱相比高效液相色谱有很大不同。2021/10/2HPLC与经典液相色谱的不同2021/10/22制备型液相色谱制备型液相色谱1.制备型HPLC与分析型HPLC的区别2.PHPLC的装置输液泵进样系统色谱柱系统检测器馏分收集器数据采集与处理系统柱结构柱尺寸柱型对填装的要求2021/10/2目的不同流速不同进样模式不同上样量不同色谱柱不同理论基础不同检测池不同1.与分析型HPLC的区别2021/10/22.PH

3、PLC装置输液泵进样系统色谱柱系统检测器馏分收集器数据采集与处理系统色谱柱是核心部件，色谱填料的填装是其操作的关键技术。制备型HPLC由于采用细的填料、高压操作，所以色谱柱多用不锈钢制作。2021/10/2制备HPLC的色谱柱系统在此处主要提出色谱柱系统，因为相对于分析型色谱,制备色谱的核心就是色谱柱。为提供既稳定又高效的色谱柱,并用小尺寸颗粒进行填充,最常用也是最易实现的效果较为理想的是动态轴向压缩柱(DACTM)技术。DAC技术为使用者提供了用任一种填料自己装填色谱柱、方便快速地调整柱长度的可能性。在制备型HPLC中,色谱柱的内径可在100～500mm之间。一般增大

4、色谱柱的直径意味着可以承载更多的样品,从而增加产量。增加色谱柱的长度则意味着可加入的样品量和分辨率的增大,但同时也增加了柱压。研究表明对于难分离物系,可以采用直径较小的色谱填料,以提高分离效率,但在分离度可以满足分离要求的前提下,使用较大直径的色谱填料将更为有利。色谱填料的填装是其操作的关键技术。制备型HPLC由于采用细的填料、高压操作，所以色谱柱多用不锈钢制作。2021/10/2制备HPLC的色谱柱系统柱尺寸：柱短、内径大、呈圆饼状在制备型HPLC分离过程中,在满足分离度要求的前提下,可以采用增加制备柱内径的方法提高制备量。柱型：锥型柱与圆柱型柱锥型柱优于圆柱型柱,锥

5、型柱的样品容量约为圆柱型柱的2倍,柱效比圆柱型柱高36%,色谱流出曲线峰值高于圆柱型柱12%。柱结构：空管柱、轴向压缩柱和径向压缩柱对填装的要求：填料的种类、装填技术2021/10/2柱结构1.空管柱与分析柱相同，常用柱内径为10～100mm，采用匀浆填充技术填装色谱填料。2.轴向压缩柱是采用活塞压缩床层，以使色谱柱内填料均匀、密实，得到更高的柱效。其原理是通过活塞的上下移动来装柱、维持柱压和卸柱，活塞周边配置了特殊设计的密封圈，能容许活塞上下自由移动，同时又能保持高的密封性。在柱内的两端均配有多孔不锈钢滤板和能使样品及洗脱液在柱截面上均匀分布的分散器。液流分散器保证了

6、大量样品尽可能地瞬时分散在柱截面上，进而快速均匀进入柱床，克服了柱中心样品局部过浓的现象，保证了色谱柱的高效。根据在分离制备过程中提供给活塞的压力是否持续，可将轴向压缩柱分为静态和动态两种，静态轴向压缩柱的效果比动态的差，但是设备比动态便宜。采用动态轴向压缩柱工艺装填的色谱柱现已基本上主宰了整个制备型色谱柱市场，国内已有动态轴向压缩柱制备色谱系统产品。2021/10/2聊城万合工业制造有限公司自主研发了高效液相轴向加压（自振）制备层析柱系统，配套高压输液泵和检测器，通过计算机自动控制，成功开发了高效液相层析中药提取装备。图1为高效液相轴向加压（自振）制备色谱柱（HPLC

7、-C200型）系统的示意图。2021/10/2径向压缩柱使用双管的色谱柱，填料装在管壁可压缩的高聚物柱管内制成柱芯，再将装有填料的柱芯放入不锈钢外套中，利用气体或液体施压于柱芯外壁和不锈钢外套之间，压紧柱芯内的填料，使色谱柱得到径向压缩。该技术目的是消除颗粒间及颗粒与管壁间的空隙。径向色谱柱的结构如图4所示，图中表明进入到径向色谱柱的样品和流动相并非如传统的轴向色谱柱从柱的一端流向另一端，而是沿径向流动，即样品和流动相是从色谱柱的周围流向柱圆心。2021/10/2径向压缩柱的主要缺点是柱芯长度固定，不如轴向压缩柱可以任意调节。此外直径较大