高效液相色谱法测定盐酸普拉克索的手性杂质.pdf

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1、药物与人2015年1月第1期第28卷总第325期M。djci＆1。Jy2o15v。1ume28NO高效液相色谱法测定盐酸普拉克索的手性杂质朱梅李善茂。(1．北京哈三联科技有限责任公司，北京，102200；2防化学院，北京，102205)摘要：目的：建立检测盐酸普拉克索手性杂质的高效液相色谱法。方法：采用DaicelChiralpakAD-H(4．6mm~)×250mmL，5um)色谱柱，流动相为正己烷一无水乙醇一二乙胺(85：15：01)；检测波长264nrn；流速：1．5ml／min；柱温：3O℃；进样体积：75L结果：s(+)盐酸普拉克索和R对映异构体的分离度为145。结论：采

2、用该液相色谱方法灵敏度高，测定快速准确。关键词：盐酸普拉克索；高效液相法；对映异构体分离；手性杂质。1仪器设备及试剂取R一()普拉克索适量，用流动相溶解制成浓度分别为0146“g／m至4．38#g／ShimadzuLC2010AHT高效液相色谱仪，LCsolution工作站，盐酸普拉克索R一mI的溶液，分别进样分析，以测得的峰面积为纵坐标，以溶液浓度为横坐标作图，计对映异构体(纯度99．9)，盐酸普拉克索对照品(S(+)，纯度999)；盐酸普拉算线性回归方程及相关系数r。实验结果：R(一)普拉克索在0．146～4．38gg／ml克索原料(批号分别为l20801、120802、120

3、803)；正己烷(色谱纯，B8LJ)；无水乙醇(相当于主成分的0．05～1．50)范围内呈现良好的线性关系，回归方程为y一(色谱纯，B&J)；二乙胺(分析纯，汕头市西陇化工厂有限公司)。94954x2662．1，r一09998。2．方法与结果2．7准确度实验2．1色谱条件取R一()普拉克索和盐酸普拉克索适量，加流动相溶解制成R一(一)普拉克色谱柱：DaicelChiralpakAD-H(4．6mm×250mlTl，5p．m)；流动相：正己烷：无水索浓度分别为1．2g／mI⋯15#g／mI⋯18#g／mI和盐酸普扣克索均为o．3mg／mL的乙醇：二乙胺=85：15：0．1；检测波长2

4、64nm；流速：1．5mL／rain；柱温：30℃；进样体混合溶液，作为供试品溶液(n一3)。另取盐酸普拉克索对照品适量制成1．5"g／m1的积：75uI。溶液，作为对照溶液。分别进样，按外标法以峰面积计算供试品溶液中含有的R一2．2溶液的制备()普拉克索，根据加入量，计算回收率。实验结果：回收率在9901～10158之精密称取盐酸普拉克索和R对映异构体对照品适量，加流动相溶解制成每间，RSD为1．O2，方法的准确度良好。1ml中各含0．0015mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液；取盐酸普拉克索对照1．8本品中R(一)普拉克索含量的测定品适量，加流动相溶解稀释，制成00015r

5、ag／ml的溶液，作为对照溶液；精密称取盐取对照溶液2O¨I，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成份色谱峰高约为酸普拉克索原料适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含0．3mg的溶液，作为供仪器满量程的l0；再取供试品溶液20“I，注入液相色谱仪，若供试品溶液的色谱试品溶液图中存在R对映异构体色谱峰，则采用外标法计算光学异构体的量。经实验测得2．3系统适用性试验本品中含有高R一对映异构体的含量分别为0．02，0．01，0．02，色谱罔见图3。在上述的液相色谱条件下，分别精密量取系统适用性试验溶液和盐酸普拉克索对照溶液各75“1分别注入液相色谱仪，盐酸普捕克索R一对映异构体与盐酸普

6、拉克索(S构型)的保留时间分别为5．29min和11．01rain，两色谱峰分离度为14．5，理论板数按普拉克索峰计算，应不低于2000。色谱图及结构式见罔1。HNSNH22HCI秘系统适应性实验图谱供试品的图谱1．R一构型图谱2手性杂质测定的HPLC圈3．讨论3．1色谱柱的选择s一(+)盐酸普拉克索ChiralpakAD-H色谱柱的固定相为硅胶表面涂敷有直链淀粉一三(3，5一二甲苯基氨基甲酸酯)，其分离作用包括相互吸引的作用及形成包埋复合物，是属于Wai—her分类中的第2种类型，很多手性化合物可以通过此类型的色谱柱得到分离，流动相应使用低极性溶剂，典型的流动相为乙醇一己烷混合物

7、，但特别要注意南于氯可以使纤维素从硅胶上脱落，因此要确保流动相中尤含氯溶剂，其固定相的每个单元都为螺旋形，而且这种螺旋结构还存在极性作用，一Ⅱ作用及形成包埋复合物等手性分离因素。淀粉代替纤维素制成的此类手性柱显示了和纤维素更为卓越的选择性，但是稳定性较差，因为淀粉是水溶性的，因此流动相中必须绝对无水才能保证柱子的寿图1本品与对映异构体的结构式命目前此类型的柱子能分离80左右可能面临到的所有手性化合物，是分离手性2．4检测限和定量限确定药物首选的色谱柱类型。R一(一)普