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《高效液相色谱法测定依托咪酯异构体杂质-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第39卷第2期广州化学、,0l_39NO.220l4年6月GuangzhouChemistryJun.20l4文章编号:1009.220X(2014)02.0045—04高效液相色谱法测定依托咪酯异构体杂质敖玲玲(湖州展望药业有限公司,浙江湖州313018)摘要:建立了依托咪酯异构体杂质的高效液相色谱(HPLC)方法,采用AD.H柱,流速0.8mUmin,检测波长235nnl。经方法学验证,该方法对依托咪酯及其异构体专属性确认分离度大于2.0,对依托咪酯异构体杂质的最小检测限(LOD)为0.002%,线性范围为0.0016txg~0.0
2、526,相关系数,=O.99944,加样回收率分别为82.0%、90.5%和96.2%。结果表明该检测方法专属性好,灵敏度高,准确,用于依托咪酯异构体杂质测定结果可靠。关键词:依托咪酯;异构体杂质;高效液相色谱法中图分类号:0657.71文献标识码:A依托咪酯为麻醉辅助剂,药典规定依托咪酯的有效成分为R构型,S构型是其异构体。我国在国家药品标准中没有测定依托咪酯异构体s构型的方法,国内文献也没有报道采用HPLC检测其异构体的方法。本文参考了色谱方面已有工并结合相关药典法规。要求,根据该物质异构体性质建立了HPLC方法测定其异构体,对依托
3、咪酯其异构体进行了很好的分离,可定量测定其有效成份及异构体杂质。1实验1.1仪器和试剂液相色谱仪(AgilentllOO),电子天平(赛多利斯)。正己烷、异丙醇均为色谱纯(国药集团)。依托咪酯对照品(99.8%),依托咪酯混旋体对照品(湖州展望药业制备并经结构确认,杂质测定定位用)。1.2实验方法1.2.1色谱条件采用色谱柱(4.6X250ITlln,CHIRALPAKAD.H5um);流动相:正己烷/异丙醇(体积比V/V)=80:20;流速0.8mL/min,检测波长235nnl;进样量20L;柱温25~C。1.2.2溶液制备精密称取
4、本品适量,加流动相定容至1rng/mL的溶液作为供试品溶液;取上述样品溶液适量于容量瓶中,加流动相定容,摇匀,得5~tg/mL的溶液,作为异构体对照液。收稿日期:2013—08.20作者简介:敖玲玲(1969~),女,工程师,执业药师;研究方向:药品质量分析及管理。linglingao@aliyun.com广州化学第39卷1.2.3系统适用性试验精密称取约20.0n依托咪酯混旋体于50mL容量瓶中,加流动相溶解,并稀释至刻度,混匀。其异构体和依托咪酯的分离度大于2.0。2结果与讨论2.1色谱条件的确定流动相的选择根据色谱柱参考资料涂敷型
5、固定相所用的流动相一般为正己烷/异丙醇混合物,所以选择流动相,就采用了正己烷/异丙醇混合物。检测波长的选择依托咪酯及其异构体紫外检测结果表明其在235nlTl处有最大吸收,因此选定235nnl作为检测波长,利于提高方法的灵敏度。2.2方法的专属性取依托咪酯混旋体适量于50mL容量瓶中,加流动相定容,测定得到图1。图1表明R构型依托咪酯和其异构体S构型依托咪酯得到较好的分离,R构型依托咪酯保留时间约7.3min,S构型依托咪酯保留时间约8.8min,二者分离度大于2.0。图1R.依托咪酯、S一依托咪酯的方法专属性考察谱图1.R一依托咪酯;
6、2.S.依托咪酯2-3方法的线性范围及最低检测限精密称取依托咪酯混旋体适量,用流动相稀释得异构体浓度约为50~g/rnL作为储备液。分别取0.015、0.04、0.1、0.2、O-3、O.4、0.5mL于10mL容量瓶中,加流动相定容。分别进样,以峰面积A对浓度C进行线性回归,回归方程为:A-47.38827C+0.933053,r-0.99944。表1表明进样量在0.0016g~0.0526Bg范围内,峰面积呈良好线性。在选定的色谱条件下,按信噪比(S/N=3),测得其最低检测限为0.002%。表1线性范围检测结果第2期敖玲玲:高效液
7、相色谱法测定依托咪酯异构体杂质472.4方法的回收率分别称取约25mg三份样品于25mL容量瓶中,分别用定量限溶液、实际值溶液和l25%规格标准溶液稀释至刻度,混匀,进样。每种样品做三次平行实验。得到加样回收率测定结果如表2。由表2知,上述三种浓度下的平均回收率(,z=3)分别为82.O%、90.5%和96.2%。由此可见,在上述三种浓度下的回收率都较高,说明该方法的准确度高,平均加样回收率为89.6%。表2加样回收率测定结果2.5检测结果的精密度取同一批依托咪酯样品,六次称样,样品溶液浓度为1.0mg/rnL,分别进样,并计算其异构体
8、的含量。图2表明该依托咪酯样品中所含异构体杂质小于0.002%(LOD)。图2依托咪酯样品的代表性图谱1.R-依托咪酯3结论经方法学验证,该方法对依托咪酯及其异构体专属性确认分离度大于2.0,对依托咪酯异构
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