高效液相色谱法测定依托咪酯异构体杂质-论文.pdf

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1、第39卷第2期广州化学、，0l_39NO．220l4年6月GuangzhouChemistryJun．20l4文章编号：1009．220X(2014)02．0045—04高效液相色谱法测定依托咪酯异构体杂质敖玲玲(湖州展望药业有限公司，浙江湖州313018)摘要：建立了依托咪酯异构体杂质的高效液相色谱(HPLC)方法，采用AD．H柱，流速0．8mUmin，检测波长235nnl。经方法学验证，该方法对依托咪酯及其异构体专属性确认分离度大于2．0，对依托咪酯异构体杂质的最小检测限(LOD)为0．002％，线性范围为0．0016txg~0．0

2、526，相关系数，=O．99944，加样回收率分别为82．0％、90．5％和96．2％。结果表明该检测方法专属性好，灵敏度高，准确，用于依托咪酯异构体杂质测定结果可靠。关键词：依托咪酯；异构体杂质；高效液相色谱法中图分类号：0657．71文献标识码：A依托咪酯为麻醉辅助剂，药典规定依托咪酯的有效成分为R构型，S构型是其异构体。我国在国家药品标准中没有测定依托咪酯异构体s构型的方法，国内文献也没有报道采用HPLC检测其异构体的方法。本文参考了色谱方面已有工并结合相关药典法规。要求，根据该物质异构体性质建立了HPLC方法测定其异构体，对依托

3、咪酯其异构体进行了很好的分离，可定量测定其有效成份及异构体杂质。1实验1．1仪器和试剂液相色谱仪(AgilentllOO)，电子天平(赛多利斯)。正己烷、异丙醇均为色谱纯(国药集团)。依托咪酯对照品(99．8％)，依托咪酯混旋体对照品(湖州展望药业制备并经结构确认，杂质测定定位用)。1．2实验方法1．2．1色谱条件采用色谱柱(4．6X250ITlln，CHIRALPAKAD．H5um)；流动相：正己烷／异丙醇(体积比V／V)=80：20；流速0．8mL／min，检测波长235nnl；进样量20L；柱温25~C。1．2．2溶液制备精密称取

4、本品适量，加流动相定容至1rng／mL的溶液作为供试品溶液；取上述样品溶液适量于容量瓶中，加流动相定容，摇匀，得5~tg／mL的溶液，作为异构体对照液。收稿日期：2013—08．20作者简介：敖玲玲(1969～)，女，工程师，执业药师；研究方向：药品质量分析及管理。linglingao@aliyun．com广州化学第39卷1．2．3系统适用性试验精密称取约20．0n依托咪酯混旋体于50mL容量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，混匀。其异构体和依托咪酯的分离度大于2．0。2结果与讨论2．1色谱条件的确定流动相的选择根据色谱柱参考资料涂敷型

5、固定相所用的流动相一般为正己烷／异丙醇混合物，所以选择流动相，就采用了正己烷／异丙醇混合物。检测波长的选择依托咪酯及其异构体紫外检测结果表明其在235nlTl处有最大吸收，因此选定235nnl作为检测波长，利于提高方法的灵敏度。2．2方法的专属性取依托咪酯混旋体适量于50mL容量瓶中，加流动相定容，测定得到图1。图1表明R构型依托咪酯和其异构体S构型依托咪酯得到较好的分离，R构型依托咪酯保留时间约7．3min，S构型依托咪酯保留时间约8．8min，二者分离度大于2．0。图1R．依托咪酯、S一依托咪酯的方法专属性考察谱图1．R一依托咪酯；

6、2．S．依托咪酯2-3方法的线性范围及最低检测限精密称取依托咪酯混旋体适量，用流动相稀释得异构体浓度约为50~g／rnL作为储备液。分别取0．015、0．04、0．1、0．2、O-3、O．4、0．5mL于10mL容量瓶中，加流动相定容。分别进样，以峰面积A对浓度C进行线性回归，回归方程为：A-47．38827C+0．933053，r-0．99944。表1表明进样量在0．0016g～0．0526Bg范围内，峰面积呈良好线性。在选定的色谱条件下，按信噪比(S／N=3)，测得其最低检测限为0．002％。表1线性范围检测结果第2期敖玲玲：高效液

7、相色谱法测定依托咪酯异构体杂质472．4方法的回收率分别称取约25mg三份样品于25mL容量瓶中，分别用定量限溶液、实际值溶液和l25％规格标准溶液稀释至刻度，混匀，进样。每种样品做三次平行实验。得到加样回收率测定结果如表2。由表2知，上述三种浓度下的平均回收率(，z=3)分别为82．O％、90．5％和96．2％。由此可见，在上述三种浓度下的回收率都较高，说明该方法的准确度高，平均加样回收率为89．6％。表2加样回收率测定结果2．5检测结果的精密度取同一批依托咪酯样品，六次称样，样品溶液浓度为1．0mg／rnL，分别进样，并计算其异构体

8、的含量。图2表明该依托咪酯样品中所含异构体杂质小于0．002％(LOD)。图2依托咪酯样品的代表性图谱1．R-依托咪酯3结论经方法学验证，该方法对依托咪酯及其异构体专属性确认分离度大于2．0，对依托咪酯异构