恩诺沙星完全抗原的制备与鉴定及其多克隆抗体的制备-论文.pdf

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1、江西农业大学学报2014，36(3)：661—664http：／／xuebao．jxau．edu．anActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensisDOI：10．13836／j．jjau．2014108丁丽军，张家禾，周作红，等．恩诺沙星完全抗原的制备与鉴定及其多克隆抗体的制备[J]．江西农业大学学报，2014，36(3)：661-664．恩诺沙星完全抗原的制备与鉴定及其多克隆抗体的制备丁丽军，张家禾，周作红，刘莉，洪伟鸣，孟婷，管远红，左伟勇(1．江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏泰州225300；2．江西农业大学动物科学技

2、术学院，江西南昌3313045)摘要：通过活化酯法将小分子的恩诺沙星(EFLX)偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上，形成偶联物EFLX—BSA和EFLX—OVA，以EFLX—BSA为免疫原试验小鼠，以EFLX-OVA为检测原通过ELISA检测小鼠血清效价，以及Ci—ELISA检测抗体的特异性和最低检测限。结果表明免疫原和检测原均成功合成，血清效价检测结果第一组为25600，第二组和第三组均大于51200，第二组最高；间接竞争ELISA法结果表明，所获抗体对EFLX特异性强，最低检出限为1．17ng／mL，／C5值为54．60ng／mL，检测范围为7．

3、39～403．43ng／mL。本试验所获得抗体效价高、特异性强，可以为ELISA试剂盒和胶体金试纸条研发提供良好的抗体材料。关键词：恩诺沙星；残留；检测；活化酯法；间接竞争ELISA中图分类号：$852．5文献标志码：A文章编号：1000-2286(2014)03-0661—04PreparationandIdentificationoftheCompleteantigenwjthEnrofloxacinandProductionofPolyclonalAntibodiesAgainstEnrofloxacinDINGLi-jun，ZHANGJia-he，ZHOUZuo

4、-hong，LIULi，HONGWei-ming，MENGTing，GUANYuan-hong，ZUOWei-yong(1．JiangsuKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnologicDrug，Taizhou225300，China；2．CollegeofAni—realScienceandTechnology，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，China)Abstract：Ovalbumin(OVA)andbovineserumalbumin(BSA)wereusedasprote

5、incarrierstosynthesizesmallmoleculedrugsEFLXcompleteantigensbytheactiveestermethod．TheconjugatesformedinthiswaywereEFLX—BSAandEFLX—OVA．TheserumtiterwasdetectedbymeansofEFLX—BSAimmunogenandEFLX—OVAcoatingantigenbyELISA，thespecificityanddetectionlimit(LD)weredetectedbyCi—ELISA．Theresultssh

6、owedthattheimmunogenandcoatingantigenweresuccessfullysynthesized．Theserumtiterdetectionresultofthefirstgroupwas25600，thoseofthesecondandthirdgroupsweremorethan51200，thatofthesecondwasthehighestofal1．TheresultofCi—ELISAindicatedthatthismethodwassensitiveandhadalineardetec—tionrangefrom7．3

7、9ng／mLto403．43ng／mL(R=0．9939)，withIC5oandLODvaluesof54．60ng／mLand收稿日期：2013—10-31修回日期：2014—03—08基金项目：安徽省科技攻关项目(1201c0602006)和江苏省“青蓝工程”中青年学术带头人项目作者简介：丁丽军(1980一)，男，讲师，主要从事兽医临床医学研究，E-mail：641042228@qq．COB；通信作者：左伟勇，副教授，博士，E—mail：jsmyjwc@126．con。·662·江西农业大学学报第36卷1．17ng／mL．Thise