己烯雌酚人工抗原的合成及多克隆抗体的制备-论文.pdf

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1、第42卷第1期浙江大学学报(医学版)V0l42No12013生JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES)2013http．ournals．zju．edu．cn／medDOI：10．3785／j．issn．1008—9292．2013．O1．005己烯雌酚人工抗原的合成及多克隆抗体的制备张书杰，雷雅静，徐晓倩，施卫星，陈枢青(1．浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所，浙江杭州310058；2．浙江大学医学院公共卫生学院，浙江杭州310058)[摘要]目的：合成己烯雌酚人工抗原，制备效价高、特异性好的己

2、烯雌酚多克隆抗体。方法：以己烯雌酚(DES)、溴乙酸乙酯、牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)等作为合成的主要原料，采用亲核取代反应，合成己烯雌酚衍生物(DES—HS)，用电喷雾电离质谱(ESI—MS)鉴定合成是否成功；然后，将DES—HS与BSA(OVA)偶联合成人工抗原，并用紫外扫描法以及高效液相色谱鉴定人工抗原是否制备成功。最后，用DES人工抗原动物免疫以获得DES多克隆抗体。结果：成功合成了偶联率为22：l的己烯雌酚人工抗原。利用已合成的人工抗原制备出了效价为l：25600、IC铀为lO．81rig／ml的己烯雌酚多克隆抗体。结论

3、：建立了己烯雌酚人工抗原合成和鉴定以及制备己烯雌酚多克隆抗体的方法。[关键词]乙底酚／免疫学；血清白蛋白，牛；双香豆乙酯；色谱法，高压液相；光谱法，质量，电喷雾电离；免疫学技术[中图分类号]R392—33[文献标志码]A[文章编号]1008—9292(2013)O1-0025-07Synthesisofartificialdiethylstilbestr0lantigenforpreparationofoolyclonalantibodiesZHANGShujie，LEIYajing，XUXiaoqian，SHIWeixing，CHENShuqi

4、ng(1．InstituteofPharmacology，ToxicologyandBiologicalPharmaceutics；CollegeofPharmaceuticalSciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310058，China；2．DepartmentofPublicHealth，ZhejiangUniversitySchoolofMedicine，Hangzhou310058，China)[Abstract]0bjective：Tosynthesizeartificialdiethylstilbe

5、strol(DES)antigenandtoprepareDESpolyclonalantibodywithhightiterandsensitivity．Methods：ThederivativeofDES(DES—HS)wassynthesizedfromdiethvlstilbestro1．ethylbromoacetate，bovineserumalbumin(BSA)andchickenovalbumin(OVA)withthenucleophilicsubstitutionreaction；thecompoundwasidentifi

6、edbyelectrosprayionizationmassspectrometry(ESI．MS)．TheDES—HSandthecarrierproteins(BSA，OVA)werecross．1inkedtopreparetheartificialantigen；theUVabsorptionspectrophotometryandhighperformanceliquidchromatography(HPLC)wereusedtoidentifythepreparedartificialantigen．Therabbitswereimm

7、unizedwiththeDESartificialantigentopreparetheDESpolyclonalantibodies．Results：TheDES—HSwassynthesized．TheDESartificialantigenwaspreparedsuccessfullywitha收稿日期：2012—10—25修回日期：2012—11·29基金项目：浙江省重大科技专项；~1(2010C13006)；浙江省卫生科研基金(2011KYA(】44)．作者简介：张书杰(1987一)，女，硕士生．从事环境污染物质的检测研究．通讯作者：

8、陈枢青(1961一)，男，教授，从事生化毒理学研究；E—mail：chenshuqing@zju·edu·CH浙江大学学报(医学版)第4