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1、刘禄成等 抗人膀胱癌P抗VEGF双功能基因抗体制备及体外效应研究 第9期·605·①抗人膀胱癌P抗VEGF双功能基因抗体制备及体外效应研究刘禄成 郭 航 范海涛 朱德淳 李然伟 李香云 (吉林大学第二医院泌尿外科,长春130041) 中国图书分类号 R737114 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2003)0920605202[摘 要] 目的:研究制备抗人膀胱癌和抗血管内皮生长因子的双功能抗体,用以导向抑制肿瘤新生血管的形成。方-915法:在制备抗人膀胱癌和抗血管内皮细胞生长因子单克隆抗体的基础上制备双功能抗体。结果:双功能抗体的IC50为1
2、0,-819-813抗血管内皮生长因子抗体的IC50为10,抗人膀胱移行细胞癌单克隆抗体的IC50为10。结论:双功能抗体的有效率明显高于单克隆抗体。[关键词]膀胱癌;血管内皮细胞生长因子;双功能抗体Thepreparationofanti2humanbladdercancerPanti2VEGFbispecificantibodyandinvitrostudyoncytotoxicityLIULu2Cheng,GUOHang,FANHai2Taoetal.DepartmentofUrology,theSecondHospitalofJilinUniversit
3、y,Chang2chun130041,China[Abstract]Objective:Toanalyseandpreparebispecificantibody(BsAb,anti2humanbladdercancerPanti2VEGF)whichcouldenhancetheeffectivenessoftumorcellkillingactivity.Methods:MonoclonalantibodiesagainsthumanbladdercancerandVEGFwereusedtoprepare-9.5-8.9bispecificantibody
4、.Results:IC50ofBsAbwas10,whilethoseofantibodiesagainsthumanbladdercancerandVEGFwere10and-8.310.Conclusion:TheeffectivenessofBsAbwassignificantlyhigherthanthatofmonoclonalantibodies.[Keywords]Bladdercancer;VEGF;Bispecificantibody 长期以来肿瘤的临床治疗一直存在三大难题:胞株 为单克隆鼠抗人VEGF165抗体,IgG2b,clone①常规
5、的放P化疗方案选择性较差;②肿瘤细胞产生26503111,Sigma。耐药性;③肿瘤发生微小转移。肿瘤的免疫治疗无113 抗人膀胱癌P抗VEGF双功能抗体制备 取抗疑为解决这些问题提供了一条新途径,其中,能靶向人膀胱移行细胞癌单克隆抗体(Ab1)杂交瘤细胞株肿瘤细胞的双功能抗体疗法因具有较好的临床应用和抗血管内皮生长因子抗体(AbVEGF)杂交瘤细胞前景,现已成为这一新途径中的研究热点之一,并使株在PEG作用下进行融合制备二次杂交瘤细胞株,得“肿瘤的导向治疗”更加接近现实。恶性肿瘤的无扩大培养,冻存,提取二次杂交瘤细胞DNA转移到限制及侵袭性生长依赖于持续的血管
6、生成,抑制肿大肠杆菌细胞中,制备基因工程型双功能抗体。1,2瘤血管生成对抑制肿瘤生长有重要意义。内皮114 二次杂交瘤(抗人膀胱癌P抗VEGF双功能抗细胞生长因子(VEGF)是肿瘤血管生成的主要促进体)筛选和鉴定 筛选融合细胞的96孔板中,发现3因子,能诱导肿瘤血管生成。采用VEGF抗体封近20%孔生长有单个簇族细胞,然后将此类孔上清闭VEGF在肿瘤治疗中有重要意义。国内外对抗人液分两步进行筛选。膀胱癌双功能抗体的研究甚少。我们成功制备了抗411411 将上清50μl加入5×10BIU287细胞P管中,人膀胱癌P抗VEGF双功能抗体,并进行体外效应研4℃30分钟
7、,洗涤后加羊抗鼠IgG2FITC,4℃30分钟,究,现报道如下。洗涤后流式细胞仪定量荧光分析。11412 另一部分上清加入预先100μlBIU287细胞1 材料与方法443×10～5×10ml包被的96孔板,测定OD405nm111 抗人膀胱移行细胞癌单克隆抗体(Ab1)杂交瘤值,选择对BIU287和免疫结合VEGF为强阳性值的细胞株的制备与鉴定 方法见参考文献4,5。孔进行单克隆化筛选4～5次,筛选方法与上述相112 抗血管内皮生长因子抗体(AbVEGF)杂交瘤细同。单克隆化后96孔阳性分布率为100%。115 杂交瘤细胞鉴定 重复试验证明抗体分泌稳①国家自然
8、科学基金资助项目,编号3
