抗人早孕因子单克隆抗体的制备.pdf

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterPreparationoftheMonoclonalAntibodiesAgainstHumanEarlyPregnancyFactorByLinlinWangSupervisor：Prof．AipingWangGaipingZhangCellBiologyDepartmentofBioengineeringApril201～．令，■哆▲彳．’1{l^1■，^I，1．^r，{原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位

2、论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：至爷彳莩日期：伊lf年叩月∥日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可

3、以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：之抒Z县同期：MI／年牛月泸日r，‘I一Ik摘要目的：通过制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组表达蛋白和合成多肽，生产鉴定抗人早孕因子单克隆抗体。方法：以pMDl8T-HSPEl模板，PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段，经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后，连接到原核表达载体pGEX．6P．1中，构建重组表达质粒pGEX6P．EPFll

4、。将表达质粒转化大肠杆菌BL21，以O．5mmol／LIPTG进行诱导表达GSToEPFll融合蛋白，Westernblot鉴定。分别以纯化的GSToEPFl1融合蛋白和MC29合成多肽为免疫原，免疫Balb／c小鼠，免疫四次，每次免疫间隔时间为三周，四免后测定抗体效价。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，经ELISA筛选与克隆化，生产鉴定单克隆抗体。结果：构建了缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组表达载体pGEX6P．EPFll，用0．5mmol／LIPTG诱导表达GST-EPFll融合蛋白，破碎表达菌体，获取上清，成功获得纯化的GSToEPFll融

5、合蛋白，分子量为35000。GST-EPFll融合蛋白免疫Balb／c小鼠和多肽免疫Balb／e小鼠，四免后测定小鼠效价分别为l：12800和l：6400，融合小鼠成功制备并筛选出四株抗人早孕因子单克隆抗体，分别为1Ell、2D7、3F8和5G12，效价均在l：3200以上。结论：在大肠杆菌中成功表达出GST-EPFll融合蛋白，以重组蛋白和合成多肽免疫小鼠，成功制备了抗人早孕因子的单克隆抗体。关键词：早孕因子；免疫抑制位点；多肽；原核表达；单克隆抗体；ELISAjj．I三、●tJ●冬●■AbstrcactAbstractobject：Thereco

6、mbinantproteinofGST-EPF1andBSA。MC29immunizedBalb／cmiceforpreparationandidentificationofthemonoclonalantibodies．Themonoclonalantibodieswereobtained．Methods：TheearlypregnancyfactorlackingtheimmunodepressionsitewasamplifiedusingthepMD18T-HSPE1plasmidastemplatebyPCR．Theproductdiges

7、tedbyBamHIandXhoIWasligasedwithaprokaryoticexpressionvectorpGEX-·6P··1toconstructtherecombinantexpressionplasmidpGEX6P—EPF11．EscherichiacoliBL21transformedwithpGEX6P-EPF1wasinducedby1mmol／LIPTGtoexpresstheinterstedprotein．Atthesametimewedesignedapolypeptide，whichiscoupledwithca

8、rrierproteinbovineserumabumin(BSA)toprepareimmunizinga