抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用.pdf

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1、110田胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(1·论著·文章编号：1007—8738(2015)01—0ll0—04抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用蓝兴国，一，冯胡一，魏德强一，李玉花，。(东北林业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150040；大庆麦伯康生物技术有限公司，黑龙江大庆163316；东北林业大学大庆生物技术研究院，黑龙江大庆163316)[摘要]目的制备抗人糖抗原5O(CA50)单克隆抗体(mAb)，鉴定其免疫学特性并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA50抗原免疫BALB／e小鼠，利用杂

2、交瘤技术进行细胞融合，筛选后得到稳定分泌抗CA50抗体的杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得mAb后，建立化学发光免疫分析法检测体系，并对其线性范围、准确度、灵敏度、重复性进行评估，同时进行血样的测定。结果筛选出4株抗人CA50的杂交瘤细胞株，效价均在1：10以上，2株配对抗体不与CA125、CA153、CA199、CA724交叉。建立的化学发光免疫分析法检测范围为0～500U／mL，回收率为107．08％，灵敏度为0．83U／mL，重复性CV值<1O％，与参比试剂检测血样的结果比较符合率为96．7％，Kappa值为0．911。结论成功制备了抗人CAS

3、0mAb，建立了人CAS0的化学发光免疫分析法检测体系。[关键词]CAS0；单克隆抗体；化学发光免疫分析法[中图分类号]R392．11，R446．61，Q813．2[文献标志码】BPreparationandcharacterizationofmonoclonalantibodiesagainsthumanCA50andestablishmentofchemiluminescenceimmunoassaysystemLANXingguo，一，FENGYue一，WETDeqiang一，LIYuhua·。CollegeofLifeSciences，North

4、eastForestryUniversity，Harbin150040；DaqingMabCom．Ine，Daqing163316；DaqingBiotechnologyResearchInstitute，NortheastForestryUniversity，Daqing163316，China[Abstract]ObjectiveTopreparetheanti-humancarbohydrateantigen5o(cA5o)monoclonalantibody(mAb)，charactedzeitsimmunologicalfeaturesande

5、stablishachemiluminescenceimmunoassaysystemwithit．MethodsBALB／cmicewereimmunizedwithhumanCAS0antigenforpreparingmAbusinghybridomatechnique．Stableanti-CA50-secretinghybridomacelllineswereobtainedafterscreening．ThemAbswerepudfiedusingproteinAafterexpandingculture．Theimmunoassaysyst

6、emwasestablishedandevaluatedinitslinearrange，accuracy，sensitivity，reproducibility，andthebloodsamplesweretestedwithit．ResultsFourhybridomacelllineswereobtainedrespectivelyandtheirtiterswereabove1：10．Ant_-C6OmAbsnearlyhadnocross．reactionwithCA125．CA153。CA199andCA724．TheIineardetect

7、ionofthechemiluminescenceimmunoassaysystemcoveredarange0—500U／mL．Therecoveryrateforaccuracywas107．O8％anditssensitivitywas0．83U／mL_Theassaywashighlyrepeatable[coeficientofvariation(CV)<10％]．Thecorrelationcoeficientwiththetestofreferencereagentwas0。96．ConclusionThemonoclonaIantibod

8、iesagainsthumanC：芦60hadbeenscreenedandac