抗人S100A4单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用.pdf

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1、l136!(】!=!细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolhnmuno1)2009，25(12·论著·文章编号：1007—8738(2009)12—1136—04抗人S100A4单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用胡向阳，黄晓明，张南，何道伟，叶银英(东南大学临床医学院实验中心，江苏南京210009)Productionandidentificationofmono．果一致。结论：该mAb是SloA4特异的，在临床应用中有更好的重复性。clonalantibodyagainsthumanS100A4[关键词]SIOOA4；mAb；肿瘤

2、标志[中图分类号]R392．11[文献标识码]AHUXiang—yⅡ，HUANGXiao—ming，ZHANGNan，HEDao—wei，YEYin—yingS100A4是$100家族的钙结合蛋白¨，在许多SchoolofClinicalMedicine，SoutheastUniversity，Nanjing人类肿瘤中高表达，其中包括乳腺癌、肺癌J、胃210009，China癌J、食管癌J、膀胱癌J、大肠癌和胰腺[Abstract]AIM：Topreparespecificmonoclonalanti-癌]。在乳腺癌¨、大肠癌¨¨和前列腺

3、癌¨中高bodyagainsthumanS100A4proteinandestablishareliable水平SIOOA4表达与预后不良强烈相关，提示methodtodetectS100A4proteinintumorspecimens．$100A4是有望应用于临床的很好的预后标志。在小METHoDS：Astandardhybridomamethodwasusedto鼠乳腺癌细胞和转基因模型系统中，S100A4可直接generatemonoclonoaIantibodiesagainstrecombinanthu—诱导肿瘤转移表型，其作

4、用可能涉及基质金属蛋白manS100A4．ELISA．Westernblotandimmunohistochem-酶活性或细胞迁移力的调节，也有研究发现S100A4istrywereusedtovalidatethisantibodyandtheantibodyiS可引起抑癌基因如p53的表达降低。为深入研究usedtoexaminespecimensofhumanbreastandcolon$100A4的作用机理以及临床检测提供有力的实验工cancers．RESULTS：OnehybridomacellIinewhichsecre-te

5、dmonoclonalantibodyspecificallyagainstrecombinanthu。具，我们以重组人S100A4作为免疫源制备了其manS1o0A4proteinwasobtainedandnamedasD101．ThemAb，用ELISA、Westernblot、免疫组化法对其进行monoclonalantibodyisshowntobemorespecificfor鉴定，并以该mAb和商品化抗$100A4多抗对少量SIOOA4proteinthanthepolyclonalantibody，atleastin临床肿

6、瘤样品进行了免疫组化染色分析。Westernblot．ThemonoclonalantibodyiSsuitablefordetec—tingtheexpressionofS100A4inspecimensfrOmhumantis—1材料和方法suesandgaveresultsconsistentwiththoseofacommer-1．1材料GlutathioneSepharose4B亲和层析柱和HiTrapcialyavailablepolyclonalantibodyinasmallgroupofbreast蛋白G—HP柱购自GE

7、公司；BALB／c小鼠(8周龄，雌性)由andcolorectaIcarcinomas．CONCLUSION：Themono-东南大学实验动物中心提供；聚乙二醇(PEG4OO)、HAT、clonaIantibodyiSspecificforS100A4andcanbeproducedHT选择培养基、弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂和鼠源onaIargescale：thereforeItwilIbemorereproducibleformAb亚类试剂盒均购自Sigma公司，RPMI1640培养基为Hy—futureclinicaIapplica

8、tions．clone公司产品，胎牛血清为杭州四季青公司产品。人乳腺癌[Keywords]SloA4；monoclonalantibody；tumormarker和大肠癌的石蜡包埋切片(4LL