抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

《抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、774ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2010，26(8·论著·文章编号：1007—8738(2010)08—0774—04抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定霍景瑞，姚西宁，刘英富，刘保才，吴峰，范国才，王清明(蛋白质组学国家重点实验室，北京蛋白质组研究中心，军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京102206)Productionandidentificationofamen-限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用问接ELISA、Wester

2、nblot、Ig亚类快速定性试纸分oclonalantibodyagainsthumanHPPCn析法等鉴定抗体的生物学特性；通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体HUOJing—rui，YAOXi—ning，LIU，LIUBao-所识别的抗原表位。结果：得到了1株稳定分泌抗人HPPCnc，Feng，FANGuo—cai，WANGQing—ming抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2一D5。经Ig亚类分析确定，StateKeyLaboratoryofProteomics，InstituteofR

3、adiationMedi—该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明，cine，AcademyofMilitaryMedicalScience，Bering102206，China该抗体检测HPPCn的极限为0．1g／L；Westernblot结果显示，该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验，证实[Abstract]AIM：Tomakemonoclonalantibody(mAb)了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认againsthumanHPPCnfortheuseinresearch

4、onHPPCn’S为，该抗体识别的表位可能为HPPCn(IHLELRN)。结论：functionanditsrelationshipwithliverdiseases．METHODS：成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。ThefemaleBALB／cmicewerejmmunizedwiththerecombi—[关键词]HPPCn；单克隆抗体；效价；噬菌体肽库nantHPPCnproteins．Splenoc~esandSp2／0cellswere[中图分类号]R392．11[文献标识码]BfusedwithPEG．15

5、00．ThepositiveclonewasidentifiedthroughindirectELISAandthensubclonedbylimiteddilu-LANP(1eucine．richacidicnuclearprotein)蛋白家tion．IndirectELlSA．WesternblotandIgsub-classidentifi—族是一类富含亮氨酸重复序列、进化上高度保守的cationkitwereusedtoidentifythemAbsproperties．Byim-mun0fIuOrescenceexp

6、eriments．westudiedthecelularIO—蛋白，广泛存在于各个物种之问。它们参与了包括calizationofHPPCn．ThemAbepitopewasalsoanalyzed转录调控、细胞信号转导、激素受体相互作用、细胞usingpeptidephagedisplaytechnology．RESULTS：Anan。凋亡等多个生物学过程。在对核糖核酸酶抑制剂ti-HPPCnmAb，namedW2-D5，wasobtained．Itbelongsto(PI)的晶体结构分析研究中，Kobe等⋯第1次描述IgGl

7、subclass．ItcouldspeciallybindtohumanHPPCn．了LANP家族的富亮氨酸重复序列(Leucine．richre．Furthermore，byimmunofluorescenceresults，weconfirmedpeat，LRR)的．片层一loop一螺旋马蹄状结构，并且指出HPPCnIocatedinthenucleusandourmAbcouldcombined了该结构域是发生蛋白质与蛋白质相互作用的结构withthenaturalprotein．WiththemAb．them_nimaI

8、detecta-基序。大量研究结果表明，LANP家族蛋白与多种肿bleconcentrationwas0。1．g／LforHPPCn；Thepeptidese-瘤的发生发展密切相关。。quenceofHPPCn7_j3(IHLELRN)wasidentified