抗人GCRG213单克隆抗体的制备与鉴定.pdf

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1、46ISSNIO07—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2012，28(1·论著·文章编号：1007—8738(2012)01—0046—03抗人GCRG213单克隆抗体的制备与鉴定伍银桥，吴本俨，王刚石，尤纬缔，王卫华，王孟薇(解放军总医院南楼消化科，北京100853)Preparationandidentificationoflllono-步鉴定。方法：在大肠杆菌中表达HIS—GCRG213融合蛋白，并以所获蛋白作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA、Westerndonalantibodyagainsthuman

2、GCRG213blot法鉴定抗体的效价及特异性。免疫组化染色观察GCRG213在胃癌和正常组织中的表达。结果：HIS-GCRG213wuYin—qiao，Ben—yan，WANGGang—shi，YOU融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，经常规的细胞融合和Wei—di，WANGWei-hua，WANGMeng—wei筛选获得2株可稳定分泌抗GCRG213的杂交瘤细胞株。DepartmentofGastroenterology，SouthBuilding，GeneralHospitalELISA法检测腹水的效价可达到1：10。，Westernblot证实该o

3、fPLA，Bering100853，China抗体可与重组HIS—GCRG213蛋白特异性结合。免疫组化染色显示GCRG213在胃癌组织中的表达明显强于正常胃黏膜[Abstract]AIM：Toprepareandcharacterizethemon-oclonalantibodyagainsthumanGCRG213．METHODS：组织。结论：成功地制备出2株抗GCRG213的mAb，为进一TheHIS-GCRG213fusionproteinwasexpressedlnE．∞fi．步研究GCRG213的生物学功能提供了有效的工具。Micewerei

4、mmunizedwiththepurifiedHIS-GCRG213pro-[关键词]胃肿瘤；GCRG213；单克隆抗体tein．Hybridomacelllinessecretingmonoclonalantibodies[中图分类号]R392．11[文献标识码]AagainstGCRG213werescreenedbyregularcellfusionandsubcloningapproach．Thetiterandspecificityoftheanti-研究表明，胃癌死亡率在我国仍居高不下，其bodywascharacterizedbyELISA

5、andWesternblot，re-发生发展涉及到多种癌基因和抑癌基因的变化。我spectively．TheexpressionofGCRG213wasdeterminedu-们应用荧光标记的mRNA差异显示技术，分析了我singimmunohistochemistrytechniqueonparafin-embedded国人胃窦部进展期腺癌组织、癌旁组织和正常胃黏tissuesectionsfr0mnormalgastricmucosaJtissuesandad-膜组织之间基因表达的差异，从中筛选并克隆出1vancedgastriccancer．RES

6、ULTS：TheHIS-GCRG213fu-条胃癌高表达的基因序列，命名为GCRG213。生物sionproteinwithrelativemolecularmassof20800wasoverexpressedinEcoilTwohybndomacelIIineswhichsecre-信息学分析显示，GCRG213序列与APE／Ref．1tedmonoclonalantibodyspecificalyagainsthuman(apurinic／apyrimidinicendonuclease，即人类无嘧啶、GCRG213fusionproteinwer

7、esuccessfullyobtained．The无嘌呤的核酸内切酶)具有61％的同源性，并含有ascitetitersofthismonoclonalantibodyreached1：10。．其C末端保守区_lJ。最近的研究结果发现GCRG213WesfemblotanalysisshowedthatthemonoclonaIantibody倾向为LINE一1家族成员。GCRG213序列与LINE．1couldbindtotherecombinantHIS．-GCRG213proteinspecif·-保守区有95％同源性，且与LINE-1类似，存在于

8、人ically．Theimmunohistochemistryshowedtha