抗OmpW单克隆抗体的制备与特性鉴定.pdf

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1、982ISSN1OO7—8738ChinJCellMolImmuno1)2011．27(9·论著·文章编号：1007—8738(2011)09—0982—04抗OmpW单克隆抗体的制备与特性鉴定马振宁，郑磊，林海美，郑允权，唐风翔，石贤爱，郭养浩，(福州大学药物生物技术与工程研究所；福建省医疗器械与医药技术重点实验室，福建福州350002)PreparationandidentificationofOmpW。以r-OmpW作为免疫抗原制备鼠mAb，以五种病原弧菌为筛选抗原。采用Westernblot、流式细胞术(

2、FCM)、间OmpWmonoclonalantibodies接ELISA法鉴定mAb的特性。结果：生物信息学分析表明OmpW是弧菌内高度保守的外膜蛋白。成功筛选到3株杂交MAZhen—ning，ZHENGLei，LINHai—mei，ZHENG瘤细胞株，其中，杂交瘤细胞株$5C10分泌的mAb的Ig亚类Yun—quan，TANGFeng．xiang，SHIXianai，GUO(型)为IgG，腹水mAb效价达4．6×10。该mAb同时识别Yang—hao。，副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和创伤弧菌，而In

3、stituteofPharmaceuticalBiotechnologyandBioengineering，与荧光假单胞菌、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、豚鼠气单FuzhouUniversity；FujianKeyLabofMedicalInstrumentation胞菌及大肠杆菌无明显的交叉反应。结论：制备的mAb可特andPharmaceuticalTechnology，Fuzhou350002，China异性识别上述5种病原弧菌，为进一步建立广谱弧菌的免疫学检测方法提供了工具。IAbstractIAIM：To

4、prepareandcharacterizethe[关键词】OmpW；弧菌；原核表达；单克隆抗体；流式细胞术mousemonoclonaIantibodiesagainstVibrioparahaemolytic—[中图分类号]Q813．2[文献标识码]Bus0mpW．METHODS：TheOmpWaminoacidsequencefrOmthreediseasedVibriowasanalyzedbyBioinformatics．弧菌属细菌广泛分布于海水、海洋沉积物和海Micewereimmunizedwith

5、r—OmpWwhichwashighlyex-洋动物体中。近年来，弧菌引起海水养殖动物发病、pressedandpurifiedinEco／／．FiveVibr『0(，坳，，，Van1werechosenasantigenformAbselection．Thechar-大面积死亡的报道日益增多，给水产养殖业造成巨actersoftheanti-0mpWmonoclonalantibodieswerestud-大的损失_1J。同时，弧菌可通过污染海产品，引发ledbyWesternblot，FlowCytometr

6、y，indirectimmunofluo。人类肠胃炎等多种疾病，已经成为引起人类细菌性rescence．IUESULTS：0mpWwastestifiedahighlycenser-疾病的主要病原之一J。目前，国内外已经报道vativemembraneprotein．Threeclonesofanti-OmpWmAb的弧菌病病原主要有副溶血弧菌(parahaemolytic一wasobtained．TheIgsubclassofthemAbsecretedfr0m，Vp)、溶藻弧菌(alginolyticus，V

7、a)、哈维氏弧fusedcelIS5C10wasIgG3．whichofthetiterwas4。6X10．菌(harveyi，vh)、创伤弧菌(vulnifcus，W)、鳗ThemAbcouldspecificallyrecognizeVibrioparahaemolytic。弧菌(Vibdoanguillarum，Van)等J。因此，研究和US，Vibrioalginolyticus，Vibrioharveyi，Vibrioanguillarum，Vibriovulnificus，whichcouldnotr

8、eactwithPseudomonas制备特异性抗弧菌的单克隆抗体(mAb)，对于水产flurosecens。Aeromonashydrophila。Aeromonassobria，Aor-养殖病害的调查和防治、保护公众健康都具有十分omonashydrophila．Escheriohiaco／．CONCLUSION：The重要的意义。mAbcouldspeciallyr