抗Ⅳ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及特性鉴定.pdf

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1、ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolhnmuno1)2011，27(7777·论著·文章编号：1007—8738(2011)07—0777—04抗Ⅳ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及特性鉴定丁细霞，狄飚，车小燕(南方医科大学珠江医院医学检验中心，广东广州510282；。广州市疾病预防控制中心，广东广州510080)Productionandcharacterizati0n0fthe方法：在表达具有良好抗原性的重组DENV4．NS1蛋白的基础上，用重组DENV4一NS1蛋白和灭活的DENV．4免疫BALB／cmonoclonalant

2、ibodiesagainstnonstruc·小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，用tural1proteinofDENV-4间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞，并结合免疫荧光测定法(IFA)和Westernblot分析对mAb的特异性进行鉴定；通过DINGXi．xia，DIBiao，CHEXiao—yan竞争抑制试验对mAb识别的抗原位点进行分析。结果：获得CenterforClinicalLaboratory，ZhujiangHospital，SouthernMed—15株特异性针对DENV4一NS1的mAbs，与其他3型DENV的iealUniv

3、ersity，Guangzhou，510282；GuangzhouCenterforDis．NS1不产生交叉反应。mAb的Ig亚类测定均为IgG1。竞争抑easeControlandPrevention，Guangzhou，510080，China制试验显示，15株mAbs存在2个不同识别抗原位点。结论：成功地获得特异性针对DENV4一NS1蛋白的mAbs，为进一步[Abstract]AIM：Toproducemonoclonalantibodies研究DENV4一NS1蛋白的结构与功能及研制DENV一4的临床(mAbs)againstnonstructural1pr

4、otein(NS1)ofDENV-4诊断试剂奠定了基础。andcharacterization．METHODS：BALB／cmicewerejm-[关键词]登革病毒；非结构蛋白1；单克隆抗体munizedwithrecombinantDENV4-NS1proteinandinactive[中图分类号]R373．33[文献标识码]BDENV-4．Splenocytesofimmunizedmicewerefusedwithmyelomacells(NS一1)toproducehybridomacelllines，se-登革病毒(DENV)属于黄病毒科黄病毒属，通cret

5、inganti-DENV4-NS1proteinmAbs．ELISAwasusedto过埃及伊蚊和白蚊伊蚊传播，包括4种血清型identifythemAbsagainstNS1ofDENV一4．Immnofluores-(DENVI一4)，任何型别的DENV感染均可引起一系cenceassay(IFA)andWesternblotanalysiswereapplied列的临床症状，表现为隐性感染、发热、登革热、或toidentifythespecificityofmAbs．RESULTS：fifteenmAbs更为严重的登革出血热(DHF)和登革休克综合征recogn

6、izingtwodiferentantigenicepitopesonNSlofDENV一4wereobtained．ThesemAbshadcharacteristicsofspecific(DSS)。由于存在抗体依赖的感染增强作用(ADE)，bindingtorecombinantNS1ofDENV-4．TheIFAshowed初次DENV感染对于异型DENV的再次感染不仅没thatallofthemAbsstronglyreactedtoDENV-4，whilehad有保护作用，反而更增加了DHF／DSS的危险性。而nocross·-reactivitytoth

7、eotherthreeserotypesofdenguevi-·在登革热流行区，大多同时存在4个血清型DENVrus．CONCLUSION：mAbsagainstNS1ofDENV-4with的流行，因发生不同血清型重复感染的危险性不断highspecificityhasbeensuccessfullyestablished．Thesere-增加，因此，建立一种能对DENV早期感染进行分型suitslaythefoundationvalueforstudyonthestructuraland诊断的方法，对于指导临床治疗和疫情监控非常重function