抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定.pdf

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1、第33卷第6期中国预防兽医学报VO1．33，NO．62011年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．2011doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．06．I8抗l型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定李晓军，，张婷婷，孟几依，刘明，李刚，张云f1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨1500012．东北农业大学动物医学学院。黑龙江哈尔滨150030)摘要：为制备抗I型鸭肝炎病毒(DHV．1)的单克4

2、L4~(MAb)，本研究采用纯化的DHV—l免疫4周龄～6周龄BALB／c雌鼠，按常规方法制备MAb，通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV一1的MAb的杂交瘤细胞株，分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6。Dot—ELISA、间接免疫荧光试验和中和试验等结果表明4株MAbs效价为1：16001：3200，与新型DHV无交叉反应。其中，BF5和BG6具有中和活性。抗DHV．1的MAb的制备为DHV一1的生物学特性研究及其快速诊断方法的建立奠定了基础。关键词：I型鸭肝炎病毒；单克隆抗体；鉴定中图分类号：

3、$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2011)06—0487—03PreparationofmonoclonalantibodiesagainstDHV一1andtheiridentificationofbiologicalcharactersLIXiao-jun，ZHANGTing—ting，MENGFan—yi，LIUMing，LIGang，zHANGYunf1．StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchIn

4、stitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciencesHarbin150001，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：Toprepareamonoclonalantibodiy(MAb)toduckhepatitisvirusI(DHV一1)，4weeksto6weeksoldfemaleBALB／cmicewereimmunizedbypu

5、rifiedDHV一1．FourhybridomassecretingMAbswereselectedbyindirect—ELISAscreening．designatedAF8BF5，BG6andDB6．Dot—ELISA．IFAtestanalysisshowedalltheMAbsreactedwithDHV一1butnocrossreactiontoNew—DHV．Inaddition．BF8andBG6showedvirusneutralizationactivity．ThepreparationoftheMAbs

6、forDHV一1establishedagoodfoundationforfurtherstudyingDHV一1．Keywords：duckhepatitisvirus】：monoclonalantibody；identification鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(Duckhepatitis较低。virus，DHV)*3]起的一类以肝炎为主要发病症状的高目前，该病毒的检测方法主要有中和试验、琼死亡率的烈性传染病⋯。DHV分为3个不同的血清脂扩散试验和RT．PCR等，但这些检测方法大都存型，即DHV．1、DHV．2和DHV3。

7、血清中和试验表在试验操作繁琐、费时等不足。而基于单克隆抗体明，DHV的3个血清型之间无抗原交叉性l2l。在(MAb)的免疫检测技术，特异性强、敏感度高，因DHV中，以DHV．1分布最广，致病性最强，对3此本研究利用杂交瘤技术制备抗DHV一1特异性周龄的雏鸭致死率高达90％以上。而DHV一2和MAb，并对其生物学特性进行鉴定，为建立一种敏DHV3只在英国和美国有过相关报道，致死率相对感、特异、快速、简便的DHV．1临床检测方法奠定牵CorrespOndingauthor收稿日期：2011-04—07基金项目：现代农业产业技术水禽

8、体系岗位科学家专项(1251116103020)作者简介：李晓军(1986一)，女，山东临沂人，硕士研究生，主要从事水禽病毒病的免疫学研究通信作者：E-mail：yunzhangOl@126．eom