抗人Flt-1单克隆抗体的制备和活性鉴定.pdf

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1、524ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2012，28(5·论著·文章编号：1007—8738(2012)05—0524一O5抗人Fit-1单克隆抗体的制备和活性鉴定谢印良，马莉，秦立，刘鹏，曹善楠，朱海燕，熊冬生，许元富(北京协和医学院中国医学科学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室，天津300020；解放军第302医院药学部，北京100039)Preparationandidentificationofmono-以重组人Fh．1胞外Ⅲ区蛋白为抗原，通过经典的杂交

2、瘤制备和活性筛选方法建立能稳定分泌抗Fh一1蛋白的mAb杂交瘤clonalantibodyagainsthumanFit-1细胞株。结果：经传统的小鼠腹水型抗体的制备和纯化方法获得了高纯度的抗人Fit一1胞外Ⅲ区蛋白的mAb。ELISA方法XIEYin—liang，MALi，QinLi，Peng，CAO测定出该抗体的免疫球蛋白亚型为IgG1，轻链为K链。West—Shan—nan，ZHUHai—yan，XIONGD0-sheng，XUernblot结果显示该抗体能特异性地识别重组人Flt一1胞外ⅢYuan．区蛋白，FACS结果表明

3、该抗体能结合到Fh一1阳性的脐静脉TheStateKeyLaboratoryofExperimentalHematology，Institute内皮细胞和K562／A02细胞表面，并呈现出抗体浓度依赖性。ofHematology．ChineseAcademyofMedicalSciences＆Peking结论：成功建立了1株能够稳定分泌抗重组人Fh一1胞外Ⅲ区UnionMedicalCollege，Tiin300020；DepartmentofPharmacy，蛋白的mAb细胞株XA12，为今后进一步开展Fh一1及其胞外302Mi

4、litaryHospitalofChina，Beijing100039，ChinaⅢ区蛋白的生物学功能研究以及基因工程抗体研究奠定了基础。[Abstract]AIM：Topreparefunctionalmonoclonalanti-[关键词]人血管内皮生长因子受体一l；单克隆抗体；血管新bodies(mAb)againstrecombinanthumanFit-l(rhFIt-1)．生；细胞因子METHODS：AcelllinestablesecretingmAbwasestab-【中图分类号]R392．11[文献标识码]Ali

5、shedbyusingFLT-1extracellulardomainIIIasantigenandhybridomatechnique．Thenitwaspurifiedinlarge-scale恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移与肿瘤诱导的血frOmmouseascitesbyproteinGaffinitychromatography．管新生(angiogenesis)密切相关¨J。血管内皮细胞ThecharacteristicsofmAbwerethendeterminedbyELISA，生长因子(vascularendothel

6、ialgrowthfactor，VEGF)在WesternblottingandFACS．RESULTS：Theimmunoglobin肿瘤组织中高表达，并且与肿瘤的增殖、侵袭和转subtypeofmAbXA12wasIgG1withkappa(K)light移呈正相关性。因此，VEGF被认为在肿瘤血管新生chains，anditcouldrecognizerhFIt-1specifically．Fu~her-中起重要的调节作用_4J，阻断VEGF与其受体的结more，mAbXA12couldbindtorhFIt一]withhi

7、ghafinity(=合，可能起到抑制肿瘤血管新生的作用，从而达到抑1．28±0．05nmol／L1．ItcouldalsobeusedtodetectFit一1-制肿瘤生长、转移的目的。positivecells．suchashumanumbilicalvascularendothelial血管内皮生长因子受体1(fms-liketyrosinecells(HUVECs)andK562／A02inadose-dependentkinase，Fit一1／VEGFR1)是VEGF最主要的受体之一，fashion．CONCLUSION

8、：Ahybridomacellinesecreting属于酪氨酸激酶受体家族第Ⅲ亚型，由1338个氨基functionalanti-rhFIt·1mAbwassuccessfullyprepared．The酸残基组成，分为胞外区、跨膜区和胞内区3个