绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、河南农业科学，2015，44(1)：139—142JournalofHenanAgriculturalSciencesdoi：10．15933／j．cnki．1004—3268．2015．01．031绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定刘静静，刘月琴，张英杰(河北农业大学动物科技学院，河北保定071000)摘要：为制备绵羊早孕因子(EPF)单克隆抗体，以纯化的EPF重组蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，免疫4次后，取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，采用间接ELISA方法筛选单克隆抗体细胞株，将筛选的细胞株注入小鼠腹腔得到腹水型抗体，用G—

2、sepharose柱亲合层析法对小鼠腹水型抗体进行纯化，应用SDS—PAGE和Westernblot分析抗体纯化后的纯度及特异性。结果显示，细胞融合后得到了1株抗绵羊EPF单克隆抗体的细胞株B4D5，纯化后的腹水型单克隆抗体纯度较高，具有较强的特异性，应用单克隆抗体检测绵羊妊娠准确率为81．3％。表明，制备的绵羊早孕因子单克隆抗体为特异性抗绵羊EPF抗体。关键词：绵羊；早孕因子；单克隆抗体；特异性中图分类号：$852．4文献标志码：A文章编号：1004—3268(2015)01—0139—04PreparationandIdentificat

3、ionofAnti—sheepEarlyPregnancyFactorMonoclonalAntibodiesLIUJingjing，LIUYueqin，ZHANGYingjie(AgriculturalUniversityofHebei，CollegeofAnimalScienceandTechnology，Baoding071000，China)Abstract：Inordertopreparateanti-sheepearlypregnancyfactor(EPF)monoclonalantibodiesandidenti~theirs

4、pecificities，spleencellsfromBALB／cmiceimmunizedfourtimeswithpurifiedEPFwerefusedwithhomologymyelomaceils(SP2／0)．ThecellstrainsofmonoclonalantibodiesweredetectedbytheindirectELISAmethod，andasciticfluidwereobtainedbviniectingcellstrainstoenterocoeliaofmice．Monoclonalantibodie

5、swerepurifiedbyG-sepharosecolumnafinitychromatography．Purityandspe—cificityofmonoclonalantibodiesafterpurificationweredetectedbySDS—PAGEandWesternblot．Acellstrainofanti．sheepEPFmonoclonalantibodieswasobtainedafterthecellfused(B4D5)．Anti—sheepEPFmonoclonalantibodieswereobtai

6、nedwithahighpurityandstrongspecificityafterpurification，andpreci—sionrateofpregnancywas81．3％．ThemonoclonalantibodieshadaspecificityEPFinsheep．Keywords：sheep；earlypregnancyfactor；monoclonalantibody；specificity在养殖生产中及时进行妊娠诊断，减少空怀发这种与哺乳动物妊娠有关的蛋白命名为早孕因子生，是提高生产效率的重要技术措施之一。目前，绵(e

7、arlypregnanyfactor，EPF)o羊受精24～48h后羊妊娠诊断周期长、效率低，需要探索一种快速、高血清中也会出现EPF，且存在于整个孕期。Smart效、简便的新方法。等发现，若绵羊怀孕期间胎儿出现死亡或流产，Morton等⋯研究发现，在怀孕小鼠血清中含有EPF很快从母体血清中消失。因此，EPF可作为绵一种能抑制T细胞和异源淋巴细胞形成玫瑰花环羊妊娠诊断和胚胎发育情况的指标。研究表明，的蛋白，该蛋白在小鼠受孕4—6h后可检测到，将EPF也存在于高度增殖的细胞中，如肾上腺皮质肿收稿日期：2014—08—04基金项目：国家肉羊产业技

8、术体系项目(CARS一39)作者简介：刘静静(1986一)，女，河南开封人，在读硕士研究生，研究方向：动物繁殖调控。E—mail：1030935377@qq．com