鸡Mx蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、第35卷第7期中国预防兽医学报Vo1．35．NO．72013年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2013doi：10．3969~．issn．1008-0589．2013．07．19鸡Mx蛋白单克隆抗体的制备及鉴定胡卫杰，王伟，孙建华，邓瑞坡，张雅春，尹海畅，盂庆文‘(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：Mx蛋白为GTP酶动态蛋白家族成员，已被证明具有抗禽流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的作用。为制备鸡Mx蛋白的单克隆抗体(MAb)，本研究以原核表

2、达并纯化的鸡Mx蛋白为免疫原，免疫BALB／c小鼠，分离脾细胞与SP2／0细胞融合，采用间接ELISA方法筛选阳性克隆，经3次细胞克隆纯化后获得4株稳定分泌抗鸡Mx蛋白抗体的杂交瘤细胞株。间接ELISA测定4株MAb纯化后腹水的效价介于l：3．2x104～1：2．5×l0之间。Westernblot结果证实4株MAb均具有良好的反应性；间接免疫荧光试验表明其中一株MAb与真核表达的鸡Mx蛋白发生反应。本研究为鸡Nix蛋白功能及表达鸡Mx蛋白的转基因动物等研究奠定了基础。关键词：鸡；Mx蛋白；单克隆抗体中图分类号：$852．4文献标识码：A文章编号：1008．0589(2013)0

3、7．0589．03PreparationandidentificationofmonoclonalantibodiesagainstchickenMxproteinHUWei~ie，WANGWei，SUNJian-hua，DENGRui—po，ZHANGYa—chun，YINHal—chang，MENGQing—wen(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，Chin

4、a)Abstract：MxproteinisamemberoflargeGTPasesfamilyandproventohaveantivirusactivitiestoavaininfluenzavirus(ArV)，ThogotovirusandVesicularstomatitisvirus．Topreparethemonoclonalantibodies(MAbs)againstchickenMxprotein，thesplenocytesofBALB／cmiceimmunizedwithpurifiedchickenMxproteinexpressedinE．co／／"

5、werefusedwithSP2／0cellsand4hybridomassecretingMAbswerescannedbyELISA．TitersoftheMAbsinasciteswererangedfrom1：3．2xl0to1：2．5xlOassayedbyELISA．WesternblotanalysisshowedthatalltheMAbsreactedpositivelywithchickenMxproteinexpressedbyE．co／i，butonly1ofwhichreactedwithMxproteinexpressedinMDCKcellstran

6、sfectedwithpcDNA3．1-Mxdetectedbyindirectimmunofluorescenceassay．TheseMAbswouldfacilitatethefurtherstudiesonthefunctionofthetransgenicanimalsexpressingchickenMxprotein．Keywords：chicken；Mxprotein；monoclonalantibodyMx蛋白属于GTP酶动态蛋白家族成员，由I的Mx蛋白具有不同的抗病毒特性。小鼠Mxl蛋白型干扰素(Interferon，IFN)诱导产生，研究表明不同已证明能够抑

7、制禽流感病毒(Avaininfluenzavirus，*Correspondingauthor收稿日期：2012．06．24基金项目：国家自然基金项目(30771615)；农业部科技重大专项(2009ZX08006．oom)；农业部科技重大专项(2009ZX08010—022B)作者简介：胡卫杰(1985．)，男，IN)iI眉山人，硕士研究生，主要从事转基因动物研究．通信作者：E．mail：mqw@hvri．ac．cn