抗人乳腺癌候选抑制蛋白1单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、12261SSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2010，26(12·论著·文章编号：1007—8738(2010)12—1226—04抗人乳腺癌候选抑制蛋白1单克隆抗体的制备及鉴定袁芳，鞠吉雨，刘艳菲，王丽娜，邸大琳，梁淑娟(潍坊医学院免疫学教研室山东省高校免疫学重点实验室，山东潍坊261053)Preparationandcharacterizationof白单克隆抗体(mAb)，并对其特异性进行鉴定。方法：构建原核表达载体pET一30a—BCSC一1，在原核表达系统E．coliBL21monoclonalantibodiesfo

2、rhumanBC．(DE3)中表达重组人BCSC一1蛋白。超声洗涤纯化重组蛋白SC-1protein作为抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2／0进行常规融合，通过有限稀释法进行YUANFang。JUJi-yu，LIUYah-／ei，WANGLi—na，Dl克隆和间接ELISA筛选，获得分泌小鼠抗人BCSC一1蛋白Da—lin．HANGShu-juanmAb的杂交瘤细胞株，通过ELISA、Westernblot等方法检测DepartmentofImmunology，WeifangMedicalUniversity；KeyLa—其特异性。将真核重组表

3、达载体pcDNA3．1／v5一HisB．BCSC．1boratoryofImmunologyinUniversitiesofShandong，Weifang转染人乳腺癌MCF-7细胞，通过免疫组化确定了人BCSC．1261053，China蛋白的表达。结果：成功构建了原核表达载体pET-30a—BCSC-1，经IPTG诱导表达出了重组人BCSC一1蛋白，主要以包涵体IAbstractIA蹦：T0obtainmonoclonaIantibodiesa．的形式存在沉淀中。用纯化的重组BCSC一1蛋白免疫小鼠后gainsthumanBCSC一1proteinforfurtherstudy

4、ofthestruc·经融合筛选得到1株稳定分泌抗BCSC一1的mAb杂交瘤细胞tureandfunctionofhumanBCSC-1protein．METHoDS：株。通过ELISA、Westernblot、免疫组化等方法鉴定，抗BC．pET·30a·BCSC一1plasmidwasconstructedandtransformedSC一1的mAb能与BCSC一1蛋白特异性结合。结论：成功制备intoEcooBI91(DE3)toexpressrecombinantprotein．了小鼠抗人BCSC一1的mAb。BALB／cmicewereimmunizedwithrecomb

5、inanthumanBC．[关键词】BCSC一1蛋白；原核表达；单克隆抗体SC-1protein，hybridomacellinessecretingmonoclonalan-[中图分类号]R392．11[文献标识码]AtibodiesagainsthumanBCSC-1proteinwerescreenedbyregularcellfusionandsubcloningapproach．Thespecificity乳腺癌候选抑制蛋白一1(breastcancersuppressorofthesemonoclonalantibodiesweredeterminedbyELISAca

6、ndidate1，BCSC-1)基因位于人类染色体11q23～andWesternblotting。ExpressionofBCSC·1proteininpcD-NA3．1／、，5-HisB．BCSC-1transfectedMCF-7celswasldenti．q24。多种肿瘤细胞转染BCSC．1基因后，肿瘤细胞fledbyImmunohistochemist~．RESULTS：Successfully的体内外恶性生物学行为下降，包括体内外增殖能constructedaprokaryoticexpressionvectorpET30a-BCSC·-力、转移能力、成瘤性等，因此BC

7、SC．1基因可能1．BCSC-1proteinwasexpressedinEcoilBL21(DE3)．为一个新的重要抑癌基因，在肿瘤发生发展中起到OnehybridomacelllinelB3stableinsecretingspecificmon-重要作用。本研究在前期研究的基础上，构建人BC．oclonalantibodieswasuccessfullyobtained．ItcouldbindSC-1基因的原核表达载体，表达纯化BCSC．1蛋白，specific