抗hiv1tat蛋白单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

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1、目录缩略语表1中文摘要3ABSTRACT6前言9文献回顾11研究内容231材料232方法253结果324讨论39小结43参考文献44个人简历和研究成果55致谢56第四军医大学硕士学佞论丈缩略语表缩略词英文金称中文全称AIDSacquiredimmunodeficiencysyndrome获得性免疫缺陷综合征BSAbovinescrumalbumin牛血清白蛋白CBPcarbohydrate-bindingprotein糖结合蛋白CDK9cyclin-dependentkinases依赖细胞周期蛋白的蛋白激酶9CTDCterminaldomainC末端区域CVco

2、efficientsofvariation变异系数CycTlcyclinTl细胞周期蛋白T1ELISAenzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验HIVhumanimmunodeficiencyvirus人免疫缺陷病毒hrhour小时HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶IFAimmunofluorescenceassay免疫荧光试验mAbmonoclonalantibody单克隆抗体minminute分钟NBCSnew-borncalfserum新生牛血清NELFnegativeelongationfa

3、ctors负延伸因子NMRnuclearmagneticresonance核磁共振0Dopticaldensity光密度OPDo-phenylenediamine邻苯二胺P-TEFbpositivetranscriptionelongationfactor正向转录延伸因子PAgelatineparticleagglutinationassay颗粒凝集试验PBSphosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液PCRpolymerasechainreaction多聚酶链反应PEGpolyethyleneglycol聚乙二醇Revregulatorofvir

4、ionproteinexpression病毒颗粒蛋白表达调节因子RIPAradioimmuneprecipitationassay放射免疫沉淀试验RITradioimmunotherapy放射免疫治疗PTDproteintransductiondomain蛋白转导域TAKTat-associatedkinase蛋白激酶Tat相关激酶TARtransactivatingresponsiveelement反式激活效应元件Tattrans-activatoroftranscription转录激活蛋白WBWesternBlot免疫印迹试验抗HIV-1Tat蛋白单克隆抗体

5、的制备、鉴定及初步应用硕士研究生：许晶导师：徐志凯教授辅导教师：黎志东副教授第四军医大学基础部微生物学教研室，西安710032中文摘要艾滋病（AIDS）是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的一种获得性免疫缺陷综合征。目前HIV常规的检测方法分为筛查试验和确认试验，最常用的筛查方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）,另外还有一些快速检测方法。确认试验包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEKHIV11I）.放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）,目前国内常用的确认试验是WB。这些检测方法的敏感性及特异性都比较好，但由于均是检测HIV抗体，对于

6、一些己经感染HIV,但仍不能检测到抗体（即“窗口期”）的样木，可能存在漏检，需要用检测抗原或者核酸的方法作为辅助试验。常用的HIV抗原检测为P24抗原检测，但P24抗原在机体感染HIV不同时期存在很大的波动性，因而存在漏检的可能性，而PCR检测HIV核酸的方法又存在假阳性高、操作复杂等问题。因此，以在HIV感染早期出现、含量较为稳定、检测便捷的抗原作为HIV新的抗原检测的靶点，建立新的抗原检测方法，可作为HIV・1抗体不确定或窗口期感染者的辅助诊断方法。转录激活蛋白（Tat蛋白）属于调控蛋白，为HIV-1的反式激活因子。Tat为HIV最早表达的蛋白质之一，因此将

7、检测Tat蛋白作为HIV感染窗口期及早期检测的辅助手段，受到了人们的关注。本研究拟制备Tat蛋片的单克隆抗体（mAb）,以建立新的HIV抗原检测的方法。实验首先以Tat蛋片免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备并获得了针对Tat蛋白的3株mAb,分别命名为A10、E2、ClOo采用间接ELISA法进一步鉴定了mAb的特异性：将上述3株mAb分别与Tat蛋口、gp41-5多肽及Bcsp31蛋口进行反应，结果3株mAb均与Tat蛋口发生反应，与gp41-5多肽和Bcsp31蛋口均不反应，表明我们制备的mAb具有较高的特异性；将这3株mAb作相对亲和力的比较，其高低

8、依次为C10>E2>A1