抗vegf抗体及抗kdr抗体对裸鼠胃癌细胞增殖和

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1、抗VEGF抗体及抗KDR抗体对裸鼠胃癌细胞增殖和【关键词】抗体　　TheEffectofAntivascularEndothelialGroanGastricCancer　　Abstract：ObjectiveTostudytheinhibitingeffectofantivascularendothelialgroetastasisandapoptosisofgastriccancer.MethodsTheinhibitoryeffectofantiVEGFantibody,antiKDRantibodyeansofanorthotopicxenotransplantedmo

2、delofmicelydividedinto4groups:①controlgroup,②groupreceivingantiVEGFantibody,③groupreceivingantiKDRantibodyand④groupreceivingantiVEGFantibodyandantiKDRantibody.AntiVEGFantibodyandantiKDRantibodyday7aftertransplantation.AllanimalsorRNAandproteininedinantisensegroupbyRTPCRanalysisandimmunohi

3、stochemistryrespectively.Apoptoticcellandcellcycleightprovideaneentofgastriccancer.　　KeyRNA表达情况；FCM检测肿瘤细胞增殖及凋亡情况。结果与对照组相比，抗VEGF抗体和抗KDR抗体组肿瘤组织中VEGF蛋白的表达降低，而VEGFmRNA表达无显著变化；肿瘤细胞发生不同程度的凋亡，凋亡率明显增高，G0/G1期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖指数降低；两者合用时作用更为明显。结论通过中和VEGF抗体和封闭KDR受体抑制血管形成，可能为胃癌的抗血管生成治疗提供依据。　　关键词：胃癌；血管内皮生长

4、因子；KDR受体　　0引言　　机体内实体肿瘤直径超过1～2mm时，必须有新生血管的生成，它是肿瘤生长和转移的前提[1,2]。血管内皮细胞生长因子(VEGF)能特异性地作用于血管内皮细胞，促进其分裂增殖。VEGF通过作用于细胞上两个特异性受体FLt和KDR发挥其生物学作用[3]。抗VEGF抗体能够明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长[4,5]。本研究将不同浓度的抗VEGF抗体和抗KDR抗体加入胃癌细胞，观察其对胃癌细胞在裸鼠体内增殖和凋亡的影响。　　1材料与方法　　1.1材料人胃癌BGC－823细胞(河北医科大学第四医院科研中心提供)；抗VEGF单抗、兔抗KDR多抗，抗IgG单抗(Oncogene

5、公司)；Trizol（GIBCO公司）；SABC免疫组化试剂盒、DAB试剂盒（武汉博士德公司）；RTPCR试剂盒（北京华美生物公司）。　　1.2细胞培养BGC823细胞用含10%小牛血清的RMPI1640培养基在5%CO2，37℃条件下进行培养。　　1.3裸鼠胃癌原位种植模型制备及标本采集40只BABL/c/nu裸鼠，雌性，4～6周龄，SPF室中饲养。将对数期细胞制成悬液，浓度为1×107/ml。将含2×106细胞的悬液接种裸鼠前肢腋下（200μl/只），每组10只。以皮下瘤结节直径超过0.5cm为成瘤标准。接种后第7天起，注射给药8周，2次/周。抗VEGF组（BGC823Vg

6、roup）：抗VEGF抗体每次每只50μg。抗KDR组（BGC823Kgroup）：抗KDR抗体每次每只50μg。抗VEGF＋抗KDR组（BGC823VKgroup）：抗VEGF抗体每次每只50μg。抗KDR抗体每次每只50μg。对照组（BGC823group）：PBS液每次每只50μg。第10周末处死动物，切除肿瘤，观察肝脏转移情况。将一部分标本福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋。另一部分标本用OCT包埋液氮速冻后70℃保存备切片。　　1.4VEGF蛋白及mRNA表达的检测①免疫组化检测：采用SABC法，组织切片脱蜡、水化后，用3%过氧化氢去除内源性酶，微波抗原修复；加入兔抗

7、人VEGF抗体。DAB显色，苏木精复染，光镜观察结果。分别用已知阳性的胃癌组织切片作阳性对照，正常小鼠和兔血清及PBS代替一抗作阴性对照。细胞浆或核呈棕黄色颗粒状分布者为阳性染色。阳性染色细胞≤10%者为阴性表达，细胞阳性染色>10%者为阳性表达［7］。②RTPCR检测：VEGF上游引物序列：5’GAAGTGGTGAAGTTCATGGATGTC3’；下游引物序列：5’CGATCGTTCTGTATCAGTCTTTCC3’；取100