兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体制备及鉴定

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1、兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体制备及鉴定;作者：杨微刘海英，武正华，唐晓波，朱大岭毕业论文【关键词】；CYP4A";,合成肽;，多克隆抗体毕业论文［摘要］;目的：制备兔抗人细胞色素P4504A11(CYP4A11)抗体，并对其特性进行初步鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列，根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联，免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸硫酸钱法纯化抗体，对纯化的抗体进行ELISA、Westernblot、免疫组化等鉴定。结果：获得抗CYP4A1

2、1合成肽的抗体。该抗体效价为1:32000o可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应，该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为53000,可识别正常肝脏的CYP4A11O结论：合成的多肽KLH复合物具有免疫原性，可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Westernblot、免疫组化等实验。毕业论文［关键词］CYP4A11;合成肽；多克隆抗体毕业论文人细胞色素P4504A"是细胞色素P4504A亚型之一,兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体制备及鉴定;作者：杨微刘海英，武正华，唐晓波，朱大岭毕业论文【关键词】；CYP4A

3、";,合成肽;，多克隆抗体毕业论文［摘要］;目的：制备兔抗人细胞色素P4504A11(CYP4A11)抗体，并对其特性进行初步鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列，根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联，免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸硫酸钱法纯化抗体，对纯化的抗体进行ELISA、Westernblot、免疫组化等鉴定。结果：获得抗CYP4A11合成肽的抗体。该抗体效价为1:32000o可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应，该抗体识别的相应抗

4、原的相对分子质量(Mr)为53000,可识别正常肝脏的CYP4A11O结论：合成的多肽KLH复合物具有免疫原性，可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Westernblot、免疫组化等实验。毕业论文［关键词］CYP4A11;合成肽；多克隆抗体毕业论文人细胞色素P4504A"是细胞色素P4504A亚型之一,主要分布在肝脏和肾脏，其可以催化多种脂肪酸（月桂酸等）的代谢，调节体内脂类代谢平衡［1］。CYP4A11催化内源性花生四烯酸代谢生成20軽基廿碳四烯酸（20Hydroxyeicosatetraenoicacid,20HETE）,而20HETE与

5、原发性高血压形成有关［2］。CYP4A11还参与防御紫外线氧化损伤的机制［3］。目前对CYP4A11的研究正逐渐深入。国外已研究岀重组CYP4A11抗体，而国内尚无这方面报道。因此,我们制备CYP4A11的抗体，这将对CYP4A11的生理功能、组织定位以及与某些疾病的关系研究起重要的推动作用。毕业论文1；材料和方法毕业论文1.1；材料；雄性大耳白兔6周龄，由哈尔滨医科大学动物实验中心提供。福氏佐剂及3,3,5,5四甲基联苯胺（TMB）均购自Sigma公司。HRP山羊抗兔IgG购自JacksonImmunoResearch公司。牛血清白蛋白（BSA）购自Solarbio公司。硝酸纤维

6、素膜（NC）购自BIORAD公司。ECLPlus购自AmershamBiosciences公司。即用型SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯。多肽合成及其与KLH、BSA的联接由北京中科亚光生物科技有限公司完成。正常人肝脏组织，由“人类肝脏蛋白质组计划”项目提供。毕业论文1.2;方法1.2.1;CYP4A11合成肽的设计；利用DNAStar软件根据抗原指数(AntigenicIndex)、亲水性结构(HydrophilicityPlotX柔韧区(FlexibleRegions)及表面概率结构(SurfaceProbability;Plot)4个

7、参数综合分析CYP4A11序列的特点,确定505〜519位15个氨基酸为欲合成的肽序列:RLRRLPNPCEDKDQLo毕业论文1.2.2;CYP4A11肽的合成及其与KLH和BSA的交联;CYP4A11合成肽由北京中科亚光生物科技有限公司采用合成肽自动合成仪合成；获得的合成肽经常规C18的RPHPLC柱进行纯化，纯度为96.9%OCYP4A11与KLH和BSA的交联采用戊二醛连接法，将5mg合成肽分别加入7mgKLH和BSA中，边振荡边缓慢加入新鲜配制的3g/L的戊