Cupriavidus necator JMP134细菌人工染色体基因组文库的构建与鉴定.pdf

Cupriavidus necator JMP134细菌人工染色体基因组文库的构建与鉴定.pdf

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1、10.3969/j.issn.1007-2861.2011.05.019CupriavidusnecatorJMP134细菌人工染色体基因组文库的构建与鉴定张俊亚宋任涛许政暟朱晨光上海大学生命科学学院上海市能源作物育种及应用重点实验室,上海200444摘要:CupriavidusnecatorJMP134(C.necatorJMP134)可以降解60多种芳香族化合物,在环境污染治理方面具有良好的应用前景.该菌株基因组含有两个苯酚降解基因簇,克隆并研究其功能具有重要的理论和应用价值.以pIndigo-BAC5为载体,构建了C.necatorJMP134的细菌人工染色体(bacterial

2、artificialchromosome,BAC)基因组文库.该文库约有9600个克隆,插入频率为99%,平均插入片段大小达到65kb,由此推测该BAC文库覆盖该菌株基因组约860倍.通过PCR筛选该文库的800个单克隆,得到11个含有C.necatorJMP134菌株的苯酚羟化酶大亚基基因phlN2的阳性克隆.研究结果表明,该文库是一个高质量、高覆盖率的BAC文库,能有效用于目的基因簇的分离.CupriavidusnecatorJMP134;苯酚降解;细菌人工染色体文库Q78A1007-2861(2011)05-0675-06ConstructionandCharacterizati

3、onofBacterialArtificialChromosomeLibraryofCupriavidusnecatorJMP134ZHANGJun-yaSONGRen-taoXUZheng-kaiZHUChen-guang2010-03-31基金项目:上海市科委基金资助项目(08DZ2270800);上海市高校选拔优秀青年教师科研专项基金资助项目(SHU08085);上海大学创新基金资助项目朱晨光(1978~),男,副研究员,博士,研究方向为微生物功能基因鉴定分析.E-mail:egzhu@shu.edu.cn时间后发现讨论@@[1]PEREZ-PANTOJAD,DELALR,PIE

4、PERDH,etal.MetabolicreconstructionofaromaticcompoundsdegradationfromthegenomeoftheamazingpollutantdegradingbacteriumCupriavidusnecatorJMP134[J].FEMSMierobiolRev,2008,32(5):736-794.@@[2]FUKUMORIF,HAUSINGERRP.AlcaligeneseutrophusJMP134“2,4-dichlorophenoxyacetatemonooxygenase”isanalpha-ketoglutarat

5、e-dependentdioxygenase[J].JBacteriol,1993,175(7):2083-2086.@@[3]FARHANAL,NEWPB.The2,4-dichlorophenolhydroxylaseofAlcaligerteseutrophusJMP134isahomotetramer[J].CanJMicrobiol,1997,43(2):202-characterizationoftworicebacterialartificialchromosome205.librariesfromtheparentsofapermanentrecombinant@@[4

6、]KIMY,HARKERAR.Cloningandcharacterizationofmappingpopulation[J].MolBreed,1996,2(1):11-24.theregulatorygenesphlR1andphlR2involvedinphenolmetabolismfromAlcaligeneseutrophusJMP134[J].Mol@@[10]耿波,关云涛,孙效文.黑龙江野鲤细菌人工染色体基Cells,1997,7(5):620-629.因组文库构建[J].中国水产科学,2009,16(2):165-@@[5]KIMUJ,SHIZUYAH,DEJONGP

7、J,etal.Stable172.propagationofcosmidsizedhumanDNAinsertsinanF@@[11]NAMYW,LEEJR,SONGKH,etal.Constructionoffactorbasedvector[J].NucleicAcidsRes,1992,20twoBAClibrariesfromcucumber(CucumissativusL.)(5):1083-1085.andidentificatio

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