bac文库构建与鉴定

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1、维普资讯http://www.cqvip.com细菌人工染色体文库的构建与鉴定周向梅，关伟军(1．中国农业大学动物医学院，北京100094；2．中国农业科学院畜牧研究所，北京100094)摘要：细茵人工染色体是继噬茵体、黏粒、噬茵体人工染色化、贮存和广泛深入的分子生物学研究。构建基因文体、酵母人工染色体等栽体系统之后发展起来的DNA载体系库时，一个最重要的指标就是它能在多大程度上代表统，以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、起始材料，即它是否能覆盖所有原初序列。如果某些操作简便等优点，而被广泛应用于基因组较大的真核生物基序列，如

2、缺少限制性酶切位点的重复序列未被克隆，因组研究中，并发挥着前所未有的重要作用。因此本文概括性这样的文库就不具代表性。同样如果文库中未能含有地阐述了细茵人工染色体的发展，以及利用此栽体构建基因足量的克隆，则极有可能会丢失某些基因。因此，文库组文库的机理和程序及其鉴定方法。建成后采用行之有效的鉴定方法来验证其质量也是关键词：细茵人工染色体；文库构建；鉴定中图分类号：$188文献标识码：A至关重要的。本文就细菌人工染色体的发展，文库的文章编号：1008—0864(2003)03—0040—04构建机理和程序及鉴定方法进行概括性地论述，试图对相关研究

3、提供参考。由于真核生物基因组十分庞大，因此对于真核基因组的研究，必须有一系列能容纳大片段基因组1细菌人工染色体(BAC)载体的构建DNA的载体，最初人们构建真核基因组文库大多使用入噬菌体(kphage)和黏粒(cosmid)作为克隆载体，1．1人工染色体的发展二者容纳外源DNA片段的最大能力分别是25kb和DNA克隆技术是分子生物学研究中重要的技术45kb。尽管这两种系统克隆效率高，但由于插入的手段之一。自1973年Cohen_6构建了第一个质粒载DNA片段较小及克隆的DNA片段不稳定，因此限体Psc101以来，越来越多的克隆载体相继涌现，使

4、得制了它们在染色体步行(chromosomewalking)中的克隆载体的整体结构和克隆效率有了很大改善。基于应用l_1]。1987年酵母人工染色体(yeastartificial生物体的许多重要性状牵涉到复杂的生理生化反应chromosome，YAC)构建成功_2]，这种载体可插入上系列，在大多数情况下受多基因或基因簇的控制，往千kb左右的外源DNA，但利用YACs有嵌合、重排往与几百一几万kbDNA片段密切相关。特别是庞和缺失现象，其插入片段的分离较难，转化效率低等大基因组的物理图谱和基因图谱的绘制也涉及到大缺陷。为了克服YAC的上述不足

5、，又相继出现了3片段DNA的研究，因此，提高载体的容纳量，一直是个候补克隆载体，如噬菌体P1克隆系统(bacterio—克隆载体的重要发展方向之一。随着脉冲交变电泳技phageP1clones)_3]，P1衍生人工染色体(P1一derived术的发展_7以及基因组研究的日益深入，对容量大，Artificialchromosome，PAC)l_4和细菌人工染色体并且能独立、稳定存在和遗传的人工染色体的研究已(Bacterialartificialchromosome，BAC)_5等载体系得到了迅速的发展。所谓人工染色体，是指一类能在统，其中目前

6、被认为比较理想的是细菌人工染色体，生物细胞中独立、稳定存在和遗传的人工重组DNA它是1992年以来发展起来的一种新型克隆载体，用分子，它至少应具备三种功能元件的类似组份：复制于构建人、动物、植物核基因组DNA大片段插入文起始点(originofreplication)，着丝点(centromere)库。由于它具有以上载体系统无可比拟的优点而迅速和端粒(telomere)。1983年，Murray_8把酵母染色得到广泛应用。体的着丝点、自主复制序列和端粒三者连接在一起，基因组文库是用重组DNA技术将某种生物细构建成了第一个人工染色体，称为酵母人

7、工染色体胞的核DNA的全部片段随机地连接到基因载体上，(yeastartificialchromosome，YAC)。在此基础上，再转移至适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而形成的Burkel_2构建了第一个YAC载体，它可插入上千kb各个片段的无性繁殖系的总集。其目的在于便于纯左右的外源DNA，是大片段基因组文库构建、染色体收稿日期：2003—05—13作者筒介：周向梅，女，1973年生，兽医师，在读博士；主要研究方向为动物基础病理。维普资讯http://www.cqvip.com步移或登陆、物理图谱构建和基因组织结构分析等的sa11NotlT

8、7—BH。sP6№t1有力工具。但由于YACs有嵌合、重排、缺失、插入片段分离较难和转化效率低等不足，使YAC的应用和研究工作受到限制，这促使科学家们积极去研究构建