栽培花生基因组bac文库的构建

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1、摘要栽培花生(ArachishypogaeaL．)是异源四倍体，含有A和B两个基因组。现有研究认为四倍体栽培种是由二倍体种A．duranensis(Agenome)和A．ipaansis(Bgenome)单一杂交后经染色体自发加倍而成。单一杂交起源、多倍化引起的生殖隔离和少数育种亲本的使用，使栽培花生基因组高度保守，遗传多样性非常有限，因此，利用遗传作图的方法分析基因十分困难。花生基因组BAC文库的构建，对利用物理图谱的方法来分析花生基因组有很大的价值，可从该文库中调取大量有用的基因，在利用基因工程技术改良作物品种性状、开展分子育种等方面发挥重要作用。本实验以栽培花生中花8号

2、植株叶片为材料，参照己报道的BAC文库构建方法，在此基础上进行技术改进，建立了一套适用于栽培花生品种的BAC文库构建技术体系。选取幼嫩的植物叶片，得到了浓度适宜，分子量大于1Mb的高分子量DNA琼脂糖包埋块儿，选择合适的酶切条件回收到符合分子量要求的DNA大片段，通过建立高效的连接体系，到目前为止共得到25，344个重组克隆。随CLOg取80个克隆经小量碱裂解法提取质粒酶切鉴定，脉冲凝胶电泳结果显示，插入片段大小在30kb．150kb之间，平均插入片段大小为80kb，空载率为1．25％。随机挑取3个BAC克隆做稳定性继代实验，连续培养100代之后，BAC克隆依然稳定，没有重排

3、现象。本实验构建的BAC文库是我国迄今构建的第一个栽培花生BAC文库，尽管文库覆盖率到目前为止还不能满足作图和测序的需要，但是建立了一个完整高效的适用于栽培花生基因组的BAC文库构建技术体系。关键词：栽培花生；BAC文库；文库构建lfff『I『

4、fI川删644AbStractAbstractCultivatedpeanut0rach捃hypogaeaL．)isallallotetraploidofrecentorigin，withallAABBgenome．Itwasreportedthatallotetraploidisarosefromhybridizationoftwo

5、wildspecies，A．duranensis(Agenome)andA．枷誊瑚西(Bgenome)，andspontaneouschromosomeduplication．Reproductiveisolationresultedt％mpolyploidizationandlimitofbreedingparentshaveledtolimitedavailabilityofalleliccombinations，lackofvariabilityinsomeimportanttraits．Therefore，theanalysisofthegenomeofpeanuti

6、sdifficulttoberealizedbygeneticlinkagemapping．Bacterialartificialchromosome(BAC)librariesalefundamentaltoolsforgenomiestudies，beingimportantforphysicalmapping，map—basedgenecloningandanalysisofgenestructureandfunction，playinganimportantroleinagriculturaldevelopment．Weconstructedabacterialart

7、ificialchromosome(BAC)libraryintheresearchbasedonthegenomeofcultivatedpeanutzhonghua8．Accordingtothetraditionalmethod，ahigh-efficienttechnologysystemofBAClibraryconstructionforpeanutwasestablished．WegottheproperconcentrationandsizeofnuclearDNAfragmentsfromyoungleaves．Throughaseriesofpartial

8、restrictiondigests，wedeterminedtheconditionsthatyieldamaximumpercentageoffragmentsbetween100kb一300kb，andwereclaimedthepartialdigestedDNAtobelinkedtothevector．Sofarwehaveobtained25，344recombinantclones．80cloneswereselectedrandomlyfortesting．TheresultofPFG