FOXP3基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定-论文.pdf

《FOXP3基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、广西医科大学学报JOURNALOFGUANGXIMEDICALUNIVERSITY2014Apr；31(2)·17O·IRSIFOXP3基因3，-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定陈泽志李劲频△杜伟伟刘竞丽莫雪安(广西医科大学第一附属医院神经内科南宁530021)摘要目的：构建FOXP3基因3’。UTR双荧光素酶基因报告载体，并通过检测荧光素酶活性，初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs。方法：利用PCR方法，根据FOXP3基因3，_UTR序列信息设计其扩增引物，以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’。UTR序列，将其克隆到pmiRB

2、—REP0RT双荧光素酶报告载体中；运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’。UTR相互作用的miRNAs；利用Lipofectamin2000试剂将miRNAsmimics与构建好的FOXP3基因3’。UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中，然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性，并与空白对照相比较。结果：经酶切及基因测序验证，成功构建含有FOXP3基因3’。UTR段双荧光素酶基因报告载体；Targetscan软件预测显示，FOXP3基因3UTR可能是miR一608的作用靶位点；双荧光报告显示，miR一608mimics组比空白对照组[(

3、0．7000q-0．01641)比(1_000±0．05575)(P

4、SACTIVITYChenZezhi，LiJinpin，DuWeiwei，LiuJingli，MoXuean．(DepartmentofNeurology，theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China)AbstractObjective：Toconstructthedual—luciferasereporterassayvectorwhichcontainsFOXP3gene3一untranslatedregionandanalyzethemiRNAsmodulatedFOXP3

5、expressionbydetectingtheluciferaseactiv—ityofFOXP3gene3’untranslatedregion．Methods：The3’UTRfragmentofFOXP3genewasamplifiedbyPCRfromgenomicDNAof293Tcellsandinsertedintoadualluciferasereportervector(pmiR—RB—RE—PORT川vector)whichwasdigestedbyenzyme．ThemiRNAstargetingFOXP3gene3’untranslatedre—gio

6、nwaspredictedbytargetscan．293Tcellsweretreatedwiththedual—luciferasereporterassayvectororemptyvectorandmiR一608mimicsorcontrolthroughtransfectionreagent．TheactivityofluciferasewasanalysedbytheDualLuciferaseReporterAssaySystem．Results：3’一UTRfragmentofFOXP3genewassuccessfullyclonedintothepmiR—R

7、B—REPORTvector．whichwasverifiedbyXhoIdigestionandDNAsequencing．ThepredictedmiRNAstargeting3’一UTRofFOXP3maybemiR一608．Ascomparedwiththecontrolgroup(1．000±0．05575)，theluciferaseactivityofpmiR—RB—REPORT一FOXP3gene3’一UTRtreatedwithmiR一608mimics(O．7000±0．