双荧光素酶报告基因检测

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划双荧光素酶报告基因检测　　双荧光素酶检测启动子活性试验服务简介　　双荧光素酶报告基因试验目前由两个主要的应用方向，第一是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用，转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。双荧光素酶报

2、告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)对于靶基因的调控，通过生物信息学方法预测microRNA潜在的靶基因以及干预位点序列，并设计合适的microRNA质粒或干预片段，同时构建靶基因的报告基因质粒，二者同时转染细胞，这是确定microRNA是否能影响靶基因的首选研究方法。实验方案：　　1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic或pMIR-REPORTLuciferase质粒目的-通过该培训员工可对保安行

3、业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2）将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或目的细胞。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。　　3）加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光素，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有

4、作用。　　双荧光素酶报告基因实验的一些影响因素及注意事项　　转载请注明来自丁香园发布日期：XX-03-2613:43文章　　分享到：收藏夹新浪微博腾讯微博开心网豆瓣社区人人网　　关键词：双荧光素酶报告基因载体点击次数：24521．报告基因检测受多种因素影响，因此同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔，并且引入另一个报告基因作为内参。　　2．细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好；长时间培养后，细胞难裂解。　　3．双荧光素酶报告基因的载体选择：　　a)萤火虫荧光素酶建议选取pGL-3或pGL-4

5、的载体或自己构建相应的载体；　　b)海肾荧光素酶建议选取phRL-TK或pGL-4代载体或自己构建相应的载体。建议海肾载体不使用强启动子，而选用中等强度的启动子。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　4．双荧光素酶报告基因的载体比例：根据实验具体情况调整。建议作一个预实验来调整，萤火虫荧光素酶检测发光值大于海肾荧光素酶发光值

6、的比例较好。　　5．最适反应温度：室温。各个组分都需要调整到室温。　　6．双荧光素酶反应体积：20ul-100ul-100ul，底物量可根据实际情况调整，但一定要保证底物过量，不然会造成检测结果出现大的偏差　　7．细胞裂解产物存放：常温不超过6小时；-20℃一个月；-80℃半年　　8．裂解产物与底物混合：要求混合快速、混合时间一致，避免荧光素酶衰变的影响。　　9．发光半衰期：　　a)单荧光素酶检测试剂盒，萤火虫荧光素酶的发光半衰期约12min　　b)双荧光素酶检测试剂盒，萤火虫荧光素酶的发光半衰期约9min，海肾荧光素酶的发

7、光半衰期约2min　　10．检测结果　　检测前应检测孔板或空管的发光值，作为仪器发光背景值，Modulus多功能检测仪的仪器背景值应小于100；　　样品检测发光值应该远大于仪器背景值，例如10000。如果样品发光值过于接近仪器背景值，说明样品中荧光素酶过少，需要考虑转染量、转染效率、裂解效率等因素。　　双荧光素酶报告系统目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员

8、的业务技能及个人素质的培训计划　　双荧光素酶报告基因测试∶结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存