PRL-1基因3’UTR荧光素酶报告基因载体及突变体的构建-论文.pdf

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1、鲤学研究2014年第36卷第2期AnatRes，2014．Vo1．36．No．2·论著·PRL一1基因3’UTR荧光素酶报告基因载体及突变体的构建周畅，陈芳，陆艳霞，袁理，李学农(广东药学院人体解剖学教研室，广东广州510006)【摘要】目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphataseofregeneratingliver．1，PRL．1)3’端非翻译区(3-untranslate．dregion，3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体，为研究miR．339—5p在结肠癌中调控其靶基因PRL．1提供有效的工具。方法PCR扩增包含PRL一1的3’UTR的

2、DNA片段，克隆至荧光素酶载体psiCHECK．2，构建psiCHECK一2／PRL．13’UTR载体；经双酶切及测序鉴定后，对psiCHECK．2／PRL．13’UTR重组质粒“种子区”的7个碱基进行定点突变．构建psiCHECK一2／PRL．13"UTR突变载体。结果克隆获得的psiCHECK．2／PRL．13"UTR载体中DNA片段大小及序列与Gen．Bank报道的一致，且插入方向正确。“种子区”的7个碱基定点突变成功。结论成功构建了含PRL一1基因3"UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体，可用于后续功能研究。【关键词】促肝细胞再生磷酸酶1；荧光素酶报告基因质粒；

3、定点突变ConstructionofPRL-1gene3’UTRluciferasereportervectorandmutationalvectorZHOUChang．CHENFang。LUYan—xia，YUANLi，LIXue—nong．DepartmentofAnatomyandHistology，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006．inaCorrespondingauthor：LIXue—nong，E—mail：zhouchangSO@163．con【Abstract】ObjectiveInthel

4、ightofphosphataseofregeneratingliver1(phosphataseofregeneratingLiver-1，PRL一1)3一untranslatedregion(3-untranslatedregion，3UTR)，weconstructsPRL-1luciferasereportergenevectorandmutantvector，whichprovidesaneffectivetoolforthestudyofmiR一339-5pincoloncancerinregulationofitstargetgenePRL-1．Method

5、sPRL一13UTRDNAfragmentamplifiedbyPCRwasclonedintotheluciferasevectorpsiCHECK·2．andpsiCHECK一2／PRL-13UTRvectorwasconstructed．AfterdoubleenzymedigestionandDNAsequencingverification．7“seeds’’ofbasepointtherecombinantplasmidpsiCHECK．2／PRL．13UTRweremutatedtoconstructpsiCHECK一2／PRL一13"UTRmutation

6、alvector．ResultspsiCHECK一2／PRL一13"UTRvectorobtainingtheDNAfragmentsequencewasidentifiedwiththatofGenBankreported，andthecorrectdirectionwasin·serted．7“seeds”showedthesuccessofsitedirectedmutation．ConclnsionTheluciferasereportergenevectorscontainingPRL-13UTRormutational3UTRareaweresuccessfu

7、llyconstructed．whichwereusedforfurtherfunctionalstudy．【Keywords】Phosphataseofregeneratingliver一1；Luciferasereportergeneplasmid；SitedirectmiRNA与肿瘤的关系已逐渐成为近年来的研发生发展中的作用及其分子机制值得我们深入探究热点。近期一项对比早期结直肠癌患者组织与讨。晚期复发患者组织的microRNA芯片结果显示：MicroRNA主要通过miRISC(miRNA．associ．Ⅱ期结直肠癌患者