IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测.pdf

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1、l20MedicalScienceJournalofCentralSouthChina．March2014．Vo1．42．No．2文章编号：2095—1116(2014)02—0120—05·基础医学·IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测江冠民，匡艳华，邱瑜，谢婉莹，张秋桂。，欧阳新平‘(1．中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院检验科，湖南长沙，410078；2．南华大学附属第一医院检验科；3．湖南省儿童医院ICU科；4．南华大学医学院生理教研室)摘要：目的构建pGL3一E

2、nhancer—ISRE4和pGL3一Enhancer．GAS两个荧光素酶报告基因载体，并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)表达的启动序列ISRE4(4个串联的ISRE序列)和GAS，(7个串联的GAS序列)，与pGL3一Enhancer连接成重组体pGL3一Enhancer．ISRE4和pGL3一Enhancer—GAS，通过转化扩增，筛选出阳性克隆，并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3一Enhance

3、r—ISRE4和pGL3一Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体，在IFN．的诱导下，能启动细胞内荧光素酶的表达。结论pGL3一Enhancer—ISRE4和pGL3．Enhancer—GAS，的荧光素酶报告基因栽体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。关键词：吲哚胺2，3-双加氧酶；启动子序列；荧光素酶报告基因；一干扰素；肿瘤免疫耐受中图分类号：R730．51文献标识码：AConstructionandAct

4、ivityAssayofLuciferaseReporterVectorContainingPromoterSequenceGASandISRE0fIDoJIANGGuanmin，KUANGYanhua，QIUYu，etal(TheClinicalLaboratoryoftheAffiliatedTumorHospitalofXiangyaMedicalSchool，CentralSouthUniversity，ChangshaHunan，410078，China)Abstract：Objecti

5、veToconstructtwoluciferasereportergenevectorpGL3一Enhancer—ISRFAandpGL3-Enhancer-GAS7，andtoidentifytheirbiologicalactivityofthem．Me~odsThepromotersequencesISRFA(4seriesISREsequence)andGAS，(7seriesGASsequence)weresynthesizedwhichregulatetheexpressionofI

6、DO，thentheywereclonedintoemptyvectorpGL3一EnhancerrespectivelytoconstructtwoluciferasereportervectorspGI3一Enhancer—ISRFMandpGL3一Enhancer—GAS7，whichwereamplifiedbytransformationandidentifiedbyrestrictionenzymedigestion，sequencing，andthebiologicalactivit

7、ydetecting．Re-suitsTwoluciferasereportervectorspGI3一Enhancer—ISRE4andpGL3一Enhancer—GAS7weresuccessfullyconstructed，theex—pressionofluciferasecouldbeinducedbyIFN一．ConclusionThetwoluciferasereportergenevectorsofpGL3-Enhancer-ISRE4andpGL3-Enhancer·-GASpr

8、ovideaveryimportanttoolforstudyingtheregulationmechanismsofIDOproteinexpressionandsupplyingafast，high—throughputscreeningforanti—tumorimmunetolerancedrugwhichtargetingtheIDO．Keywords：indoleamine2，3-dioxygenase；promotersequence；luciferasereport