启动子,荧光素酶报告基因

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划启动子,荧光素酶报告基因　　启动子活性分析　　一、　　二、实验目的：分析启动子活性实验原理：荧光素酶报告基因的活性用Dual-Luciferase?ReporterAssay　　System试剂盒来检测。利用单通道多标记荧光检测仪测定荧光素酶活性。在双荧光素酶系统中，除了用于检测启动子活性的萤火虫荧光素酶外，另外一种组成型表达的Renilla荧光素酶质粒PRL-TK也被同时转染入细胞内作为内参。　　三、实验材料：Dual-Luciferase?Rep

2、orterAssaySystem试剂盒，　　PBS，细胞裂解液，96孔，　　四、　　五、实验设备：单通道多标记荧光检测仪实验方法及步骤：　　1）启动子萤光素酶报告载体与共转染质粒按照质量等比例、总量μg的　　原则转染细胞，36h后收获细胞；　　2）96孔板吸弃细胞培养基，PBS冲洗细胞一次，加入1×PLB细胞裂解液目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划启动子,荧光

3、素酶报告基因　　启动子活性分析　　一、　　二、实验目的：分析启动子活性实验原理：荧光素酶报告基因的活性用Dual-Luciferase?ReporterAssay　　System试剂盒来检测。利用单通道多标记荧光检测仪测定荧光素酶活性。在双荧光素酶系统中，除了用于检测启动子活性的萤火虫荧光素酶外，另外一种组成型表达的Renilla荧光素酶质粒PRL-TK也被同时转染入细胞内作为内参。　　三、实验材料：Dual-Luciferase?ReporterAssaySystem试剂盒，　　PBS，细胞裂解液，96孔，　　四、　　五、实验设备：单通道多标记荧光检测仪实验

4、方法及步骤：　　1）启动子萤光素酶报告载体与共转染质粒按照质量等比例、总量μg的　　原则转染细胞，36h后收获细胞；　　2）96孔板吸弃细胞培养基，PBS冲洗细胞一次，加入1×PLB细胞裂解液目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　20μl，置于室温震荡裂解20min；　　3）轻轻吹打细胞，取10μl细胞裂解液加入50μlLuciferaseAssayReage

5、nt，　　轻轻震荡混匀，立刻置于单通道多标记荧光检测仪中测定FireflyLuciferase活性；　　4）读数后立即加入50μlStop&Glo?Reagent轻轻震荡混匀，读取Renilla　　Luciferase活性；　　5）所得的结果为各个实验样品的FireflyLuciferase活性与Renilla荧光素酶　　活性的比值。每个实验组重复3-4孔，整个实验独立重复3次。实验结果均为3次独立的实验结果的平均值。所有的结果均以平均值±标准差(mean±)表示。　　六、注意事项　　1.做好对照。　　2.多做几个复孔，求平均值。　　七、补充知识点　　双荧光素

6、酶报告基因实验　　1.试剂盒：Dual-GloTMLuciferaseAassySystem组成如下：?Dual-Glo?萤光素酶缓冲液　　?Dual-Glo?萤光素酶底物　　?Dual-Glo?Stop-Glo?缓冲液目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　?Dual-Glo?Stop-Glo?底物　　2.报告基因的作用　　?细胞信号转导途径　　?启动子/增强

7、子　　?受体结合　　?病毒/细胞相互作用　　?转录因子　　?药物诱导作用或“效果”　　3.原理　　–制备含有luc/Rluc的DNA　　–转染　　–提供刺激　　–测量荧光　　–用海肾萤光素酶作对照归一实验变化　　归一反应=实验的(萤火虫萤光素酶)/对照的　　–所有的缓冲液存于室温,所有的底物存于–20°C　　两步加入试剂：加，读，加，读　　6.检测步骤：　　实验前，将Dual-Glo?萤光素酶试剂平衡到室温　　1.确认使用的细胞板可以用于荧光检测目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业

8、的安全感。为了适应公司新战略的发展，保