人 GADD45α荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定-论文.pdf

《人 GADD45α荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、·52·解放军医药杂志2014年7月第26卷第7期Med＆PharmJChinPLA，Vo1．26，No．7，Ju1．2014·论著·人GADD45oL荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定殷宏，王恺，田世民，安子扬，邹明强[摘要]目的为检测环境中可能存在的致癌物，建立生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(GADD45ct)双荧光素报告基因系统，构建新型人GADD45c~荧光素酶报告基因质粒。方法在GADD45ct基因启动子序列2．2kb及其后基因组DNA序列2．6kb范围内，设计3对引物进行搭桥PCR，获得全长

2、为4924bp的目的序列，插入pGL4．10[1uc2]质粒相应位点内。质粒构建成功后测定全长并进行酶切鉴定。结果正确扩增了全长为4．9kb的人GADD45基因片段，成功构建了人GADD45a报告基因质粒(pGD2．2K—luc2)。结论在质粒设计中加入了存在p53非依赖性BRCA1结合位点的GADD45c~基因第1个内含子，构建成功的pGD2．2K1uc2，为转染人源性细胞建立GADD45d双荧光素报告基因系统打下了基础。[关键词]生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45；乳腺癌易感基因；聚合酶链反应[中国图

3、书资料分类号]Rll4[文献标志码]A[文章编号]2095—140X(2014)07—0052-04[DOI]10．3969／j．issn．2095—140X．2014．07．013ConstructionandIdentificationofHumanGADD45a-luciferaseReporterGenesPlasmidYINHong，WANGKai，TIANShi—min，ANZi-yang，ZOUMing—qiang(ChineseAcademyofInspectionandQuaranti

4、neAQSIQKeyLaboratoryofToxicology，Beijing100123，China)[Abstract]0bjectiveToestablishagenicsystemforGADD45ctdualluciferasereporter(growtharrestDNAdamage45ct)andconstructanewhumanGADD45e~-luciferasereportergenesplasmidinordertodetectthepossiblecar—cinogensp

5、resentintheenvironment．MethodsBridgepolymerasechainreaction(PCR)wasdesignedwiththreepairsofprimersattherangefromhumanGADD45ctgenesubsequencecovering2．2kbtothefollowing2．6kbgenomicDNAse—quences．Thefulllengthof4924bpsequencewasinsertedinthecorrespondingsit

6、eofpGL4．10[1uc2]plasmid．Afterestablishingtheplasmidconstructionsuccessfully，full-lengthsequencingwasdetected，andendonucleasedigestionwasi—dentified．ResultsFulllength4．9kbofhumanGADD45otgenefragmentwascorrectlyamplified，andtheGADD45oL—luciferasereporterpl

7、asmid(pGD2．2k—luc2)wassuccessfullyconstructed．ConclusionTheplasmidpGD2．2k—luc2issuccessfullyestablishedbyusingplasmidwithadditionofthefirstintronofthehumanGADD45c~gene，whereap53一in—dependentBRCA1bindingsiteisoccupied，anditbuihsthefoundationforestablishin

8、gthehumanGadd45otduallucifer—asereportergenesystem．[Keywords]GrowtharrestDNAdamage45ct；Breastcancersusceptibilitygene；Polymerasechainreaction生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45启动子及其第3个内含子融合到绿色荧光蛋白前(GADD45ot)是第1个被检出的p53下游靶基因，可后，转染人淋巴母细胞TK6，建立