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《昆虫神经毒素lqhit2的表达、抗血清制备及活性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物工程学报ChinJBiotech2008,October25;24(10):1761-1767journals.im.ac.cnChineseJournalofBiotechnologyISSN1000-3061cjb@im.ac.cn©2008InstituteofMicrobiology,CAS&CSM,Allrightsreserved研究报告昆虫神经毒素LqhIT2的表达、抗血清制备及活性分析李洪波,夏玉先重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市杀虫真菌工程技术研究中心,重庆400
2、030摘要:根据毕赤酵母密码子偏爱性,不改变毒素蛋白质一级结构,设计合成了昆虫神经毒素LqhIT2基因,并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K。在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物经镍亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,制备了特异性较高的抗血清,抗体滴度超过1:128000。利用制备的抗血清,采用斑点杂交,筛选得到了较高水平分泌表达重组LqhIT2的酵母转化子,摇条甁件下,毒素表达量约9mg/L。大肠杆菌表达产物没有生物
3、活性,酵母表达产物经注射蝗虫表现出杀虫活性。关键词:昆虫神经毒素,LqhIT2,抗血清Expression,AntiserumPreparationandBioactivityAssaysofInsectNeurotoxinLqhIT2HongboLi,andYuxianXiaGeneticEngineeringResearchCenter,BioengineeringCollege,ChongqingUniversity,Chongqing400030,ChinaAbstract:Accordi
4、ngtothecodonbiasofPichiapastoris,thematureinsectneurotoxingeneLqhIT2wassynthesizedbasedonitsaminoacidsequenceandwasclonedtovectorofPET-30a(+)andpPIC9Krespectively.ThefusionproteinexpressedinEscherichia.coliwasinducedwithIPTGandpurifiedwithNi-NTAHisBin
5、dColumn.ThepurifiedfusionproteinwasusedtoimmunizeBALB/cmice,andantiserumobtainedwashighlyspecificwiththetiterofover1:128000.Usingtheantiserum,high-levelexpressiontransformantsofP.pastoriswerescreenedbydotblotting.ThehighestexpressionofrecombinantLqhIT
6、2wasabout9mg/Linbaffledflasks.ThefusionproteinofLqhIT2expressedinE.coliwasnottoxictolocust,buttherecombinantLqhIT2expressedinP.pastorishadinsecticidalactivityagainstlocustthroughinjection.Keywords:insectneurotoxin,LqhIT2,antiserum昆虫神经毒素是一类作用于昆虫神经系统并具基
7、和2个β-亚基组成。已报导的高度昆虫专一性的毒杀作用的多肽类神经毒素。到目前为止,已分离神经毒素主要作用于昆虫钠离子通道,自1971年从纯化和命名的昆虫神经毒素近百种,蝎子是该类毒非洲蝎AndroctonusaustralisHector毒液中分离到第[4]素的主要来源之一。蝎长链昆虫神经毒素是一类作一种昆虫神经毒素AaIT以来,国内外学者己从用于昆虫钠离子通道的昆虫神经毒素,由60~70个10多种蝎子的毒液中分离得到了数十种昆虫神经[1−3]氨基酸组成,有2~4对链内二硫键,由1个α-亚毒素。R
8、eceived:February26,2008;Accepted:April17,2008Supportedby:theNationalHighTechnologyResearch&DevelopmentProgramofChina(863Program)(No.2006AA10A212).Correspondingauthor:YuxianXia.Tel:+86-23-65120486;Fax:+86-23-65120490;E-mail:yuxianxia@cqu.edu.cn
