抗血清制备及抗体效价测定

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1、.摘要........................................................................................................................................4【实验过程】3PartⅠ.NDV抗血清制备3一、实验原理3二、实验仪器、材料和试剂31.仪器32.材料33.试剂3三、方法和步骤3（一）NDV兔抗血清制备31.家兔捉拿方法32.家兔固定方法33.初次免疫34.二次免疫35.终末免疫36.试血37.

2、颈动脉放血38.血清分离39.抗血清保存3（二）NDV鼠抗血清制备31.小白鼠的捉拿和固定32.初次免疫33.二次免疫34.终末免疫35.试血36．放血37．血清分离38．抗血清保存3PartⅡ.琼脂双扩散实验检测抗体效价3一、基本原理3二、实验仪器、材料和试剂31.仪器32.材料33.试剂3三、方法和步骤31.灭活鸡新城疫病毒Ulster2C株抗原提取32.1%琼脂糖配制33.倒平板34.打孔35.稀释抗血清36.加样37.孵育3..8.结果观察3PartⅢ.酶联免疫吸附试验测定NDV抗血清效价3一、基本原理3二、实验仪

3、器、材料和试剂31.仪器32.材料33.试剂3三、方法和步骤31.鸡新城疫病毒Ulster2C株灭活抗原提取32、抗原包被33.封闭34.洗板35.稀释抗血清36.加抗血清37.洗板38.加酶标二抗39.洗板310.显色311.终止312.读数313.结果判定3PartⅣ.免疫印迹实验鉴定抗体的特异性3一、基本原理3二、实验仪器、材料和试剂31.仪器32.材料33.试剂3（1）SDS-PAGE相关试剂：3（2）Westernblotting相关试剂：3三、方法和步骤31.SDS-PAGE32.转膜33.免疫检测3（1）膜的

4、封闭3（2）洗膜3（3）加入一抗3（4）洗膜3（5）与二级抗体作用：3（6）洗膜3（7）Odessey近红外成像仪扫描成像3【实验结果及分析】3..NDV抗血清制备及抗体效价测定摘要：抗血清，新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ul

5、ster2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。也叫免疫血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行家兔与小鼠的新城疫病毒抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验、兔疫印迹实验对其进行抗体效价检测。关键字：NDV抗血清抗体效价免疫【实验过程】本次实验一共分为四个大步骤：PartⅠ.NDV抗血清制备PartⅡ.琼脂双扩散实验检测抗体效价PartⅢ.酶联免疫吸附试验测定NDV抗血清效价PartⅣ.免疫印迹实验鉴定抗体的特

6、异性PartⅠ.NDV抗血清制备一、实验原理将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonalantibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特

7、异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。本实验介绍新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV..）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害

8、鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。二、实验仪器、材料和试剂1.仪器5mL无菌冻存管，2.5mL和1mL注射器，塑料静脉插管，碘酒，75％酒精棉球，剪刀，止血钳，250mL无菌