抗血清制备及抗体效价测定

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1、NDV抗血清制备及抗体效价测定论文摘要........................................................................................................................................4【实验过程】4PartⅠ.NDV抗血清制备4一、实验原理4二、实验仪器、材料和试剂51.仪器52.材料53.试剂5三、方法和步骤5（一）NDV兔抗血清制备51.家兔捉拿方法52.家兔固定方法5

2、3.初次免疫64.二次免疫65.终末免疫66.试血77.颈动脉放血78.血清分离79.抗血清保存7（二）NDV鼠抗血清制备81.小白鼠的捉拿和固定82.初次免疫83.二次免疫94.终末免疫95.试血96．放血107．血清分离1025NDV抗血清制备及抗体效价测定论文8．抗血清保存10PartⅡ.琼脂双扩散实验检测抗体效价11一、基本原理11二、实验仪器、材料和试剂111.仪器112.材料113.试剂11三、方法和步骤111.灭活鸡新城疫病毒Ulster2C株抗原提取112.1%琼脂糖配制113.倒平

3、板114.打孔115.稀释抗血清126.加样127.孵育128.结果观察12PartⅢ.酶联免疫吸附试验测定NDV抗血清效价13一、基本原理13二、实验仪器、材料和试剂131.仪器132.材料133.试剂13三、方法和步骤131.鸡新城疫病毒Ulster2C株灭活抗原提取132、抗原包被133.封闭144.洗板1425NDV抗血清制备及抗体效价测定论文5.稀释抗血清146.加抗血清147.洗板148.加酶标二抗149.洗板1410.显色1411.终止1412.读数1413.结果判定15PartⅣ.免

4、疫印迹实验鉴定抗体的特异性15一、基本原理15二、实验仪器、材料和试剂151.仪器152.材料153.试剂15（1）SDS-PAGE相关试剂：15（2）Westernblotting相关试剂：16三、方法和步骤161.SDS-PAGE162.转膜173.免疫检测17（1）膜的封闭17（2）洗膜17（3）加入一抗17（4）洗膜18（5）与二级抗体作用：18（6）洗膜1825NDV抗血清制备及抗体效价测定论文（7）Odessey近红外成像仪扫描成像18【实验结果及分析】18NDV抗血清制备及抗体效价测定

5、摘要：抗血清，新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。也叫免疫血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，

6、以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行家兔与小鼠的新城疫病毒抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验、兔疫印迹实验对其进行抗体效价检测。关键字：NDV抗血清抗体效价免疫【实验过程】本次实验一共分为四个大步骤：PartⅠ.NDV抗血清制备PartⅡ.琼脂双扩散实验检测抗体效价PartⅢ.酶联免疫吸附试验测定NDV抗血清效价PartⅣ.免疫印迹实验鉴定抗体的特异性25NDV抗血清制备及抗体效价测定论文PartⅠ.NDV抗血清制备一、实验原理将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺

7、激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonalantibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗

8、原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。本实验介绍新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，