大豆天冬氨酸蛋白酶基因启动子的克隆及其表达活性分析-论文.pdf

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1、第4O卷第12期西北农林科技大学学报(自然科学版)Vo1．40No．122012年l2月JournalofNorthwestA&FUniversity(Nat．Sci．Ed．)Dee．2Ol2网络出版时间：2012-11-1915：15网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／61．1390．S．20121119．1515．001．html大豆天冬氨酸蛋白酶基因启动子的克隆及其表达活性分析赵艳，孙天国，王慧，张梅娟，崔巍，沙伟(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院遗传重点实验室，黑龙江齐齐

2、哈尔161006)[摘要]【目的】克隆大豆天冬氨酸蛋白酶基因(soyAP1)启动子，并对其表达方式及活性进行分析。【方法】利用TAIL—PCR方法从大豆基因组DNA中克隆soyAP1基因启动子片段。利用启动子在线预测工具分析soyAP1基因启动子片段的启动子元件，并用克隆得到的SAP片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子，构建表达载体pCAM—SAP。通过农杆菌介导法，使其在大豆各组织中进行瞬时表达，用GUS组织化学染色法分析SAP在各组织中的表达活性。【结果】克隆获得了大豆soyAP1基因的启动子片段

3、，长1650bp，并将之命名为SAP，其转录起始位点可能是553bp处的A；PLACE分析表明，SAP序列中含有多种典型的种子特异性表达元件；GUS组织化学染色显示，SAP驱动的GUS基因在大豆根、茎、叶中基本不表达，但在种子中有较高的表达活性，且表达强度与CaMV35S启动子相近。【结论】大豆SAP启动子可能具有种子特异表达特性。[关键词]大豆}天冬氨酸蛋白酶基因；启动子；瞬时表达[中图分类号]$565．103．53[文献标志码]A[文章编号]1671—9387(2012)12—0079—06Oloningandac

4、tivityanalysisofsoybeansoyAP1promoterZHAOYan，SUNTian—guo，WANGHui，ZHANGMei—juan，CUIWei，SHAWei(KeyLaboratoryofGenetics，CollegeofLifeScienceandAgro—Forestry，QiqihaerUniversity，Qiqihaer，HeilongJiang161006，China)Abstract：[Objective]Theaimwascloningandanalyzingtheexpr

5、essionpatternandactivityofsoy～beanasparticproteinasegenesoyAP1promoter．[Method]The5f_flankingupstreamsequenceofsoyAP1genewasisolatedfromthegenomicDNAofsoybeanbyTAIL—PCRmethod．Promoteronlinetoolswereusedtoanalyzethesequence．ThebinaryexpressionvectorpCAM—SAPwascon

6、structedbyreplacingCaMV35SpromoterofpCAMBIA1301withSAPfragment．TransientexpressioninsoybeantissueswasconductedbyAgrobacteriumtumefaciensmediatedmethod，andtheactivityofSAPwascharacterizedbyhistochemicalGUSstaininganalysis．[Result]soyAP1promoter，namedSAP，wascloned

7、withalengthof1650bp．Thetranscriptionstartsitemightlocateat553bpandthebasewasA．SequenceanalysisbyPLACErevealedthatthisfragmentcontainedaseriesofmotifsrelatedtoseed—specificpromoters．There～sultsofhistochemicalGUSanalysisshowedthattherewerelittleornoGUSactivitiesin

8、roots，stemsandleaves，buttherewerehigheractivitiesinsoybeanseeds，whichwassimilartothatdrivenbyCaMV35Spro～moter．[Conclusion]ItisinferredthatSAPpromotermightdrivedownstr