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《大豆硬脂酸-acp脱饱和酶基因启动子的克隆及其表达活性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、作物学报ACTAAGRONOMICASINICA2011,37(7):1205−1211http://www.chinacrops.org/zwxb/ISSN0496-3490;CODENTSHPA9E-mail:xbzw@chinajournal.net.cnDOI:10.3724/SP.J.1006.2011.01205大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子的克隆及其表达活性分析12,**11111,*张庆林赵艳李晓薇翟莹张艳王英李景文1,*王庆钰12吉林大学植物科学学院,吉林长春130062;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江齐齐哈尔161006摘要:以吉豆2号基因组为模板,通过TAI
2、LPCR方法,扩增得到大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子片段SACPD-Cp。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列中含有多种典型的种子特异性表达序列元件。将SACPD-Cp片段取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-SACPD-Cp,通过农杆菌介导法在大豆组织中进行瞬时表达,GUS组织化学染色和荧光定量研究其表达特性。结果表明,SACPD-Cp驱动GUS基因在种子中的表达活性是CaMV35S启动子的93.01%;SACPD-Cp启动子与现已知启动子无同源性,仅在大豆种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶组织中均未检测到GUS活性,证实SACPD-Cp
3、是一个新的种子特异性启动子。关键词:大豆;硬脂酸-ACP脱饱和酶基因;序列分析;种子特异性启动子;瞬时表达CloningandActivityAnalysisofSoybeanSACPD-CPromoter12,**11111,*ZHANGQing-Lin,ZHAOYan,LIXiao-Wei,ZHAIYing,ZHANGYan,WANGYing,LIJing-Wen,1,*andWANGQing-Yu12CollegeofPlantScience,JilinUniversity,Changchun130062,China;CollegeofLifeScienceandAgro-Forestr
4、y,QiqihaerUniversity,Qiqihaer161006,ChinaAbstract:TheSACPD-CppromoterofsoybeanSACPD-CwasisolatedfromthegenomicDNAofsoybeancultivarJidou2usingTAILPCR.PromotersequenceanalysisbyPLACEshowedthattheclonedfragmentcontainedmanymotifsthatconstitutedtheseed-specificcis-elements.ReplacingCaMV35SpromoterofpCAM
5、BIA1301withtheSACPD-Cpfragment,thebinaryexpres-sionvectorpCAM-SACPD-Cpwasconstructed.TransientexpressionbyAgrobacteriumtumefaciensmediatedmethod,thehis-tochemicalGUSanalysisandfluorometricGUSanalysiswereusedfortestingtheexpressionoftheGUSactivity.TheresultsindicatedthatGUSactivitydrivenbySACPD-Cpfra
6、gmentwas93.01%ofthatdrivenbyCaMV35Spromoter.TheSACPD-Cppromoterdidnothavethehomologycomparedwiththereportedpromoters.GUSactivityassaysindicatedthatGUSwasex-pressedonlyinseeds,butnotinroots,stemsandleaves,whichsuggeststheSACPD-Cpisaseed-specificpromoter.Keywords:Soybean;SACPD-Cgene;Sequenceanalysis;S
7、eed-specificpromoter;Transientexpression粮食作物和油料作物的种子是食用的主要部分,在定向改良农作物品质性状方面具有重要的理论和与人们的日常生活密切相关,因此种子中的营养成实际意义。分是植物基因工程改良的重要目标。种子特异表达随着基因工程的不断发展,对组织特异表达启启动子能够驱动基因在种子中专一性表达,使目的动子的需求越显迫切。近年来,有很多种子特异启[1]基
