大豆转录因子GmERF5启动子的克隆及活性分析-论文.pdf

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1、生物技术通报·研究报告·Bl0TECHNOLOGYBULLETIN2014tIE第1期大豆转录因子GmERF5启动子的克隆及活性分析翟莹张军赵艳孙天国姚雅男杨晓杰(1．齐齐哈尔大学生命科学与农林学院遗传重点实验室，齐齐哈尔161006；2．黑龙江省兽医科学研究所，齐齐哈尔161006；3．长春农业博览园，长春130117)摘要：乙烯响应因子(Ethylene—responsivefactors，ERFs)广泛参与植物对生物和非生物胁迫的应答。从大豆吉林32的基因组DNA中分离到GmERF5的启动子片段，全长1924bp。该区段含有9种与逆境相关的顺式作用元件，即

2、G—box、GT一1、LTRE．1、W—box、TL1、DPBF、MYB、MYC和BIHD10S。将该启动子构建到植物表达载体pCAMBIA1301上与葡萄糖苷酸酶(GUS)基因融合，注射法转化烟草叶片，并进行干旱、高盐和低温处理，通过GUS组织化学染色和GUS荧光值的测定分析启动子的启动活性。结果表明，在未处理条件下，该启动子能驱动下游G基因的表达。干旱和低温处理10h能明显增强GmERF5P的启动活性。关键词：大豆GmERF5GUS活性启动子逆境诱导CloningandActivityAnalysisofSoybeanGmERF5PromoterZhaiYi

3、ngZhangJunZhaoYahSunTianguoYaoYananYangXiaojie(1．CollegeOfLifeScienceandAgro-forestry，QiqihaerUnivesity，KeyLaboratoryofGenetics，Qiqihaer161006；2．HeilongjiangInstituteofVeterinaryScience，Qiqihaer161006；3．ChangchunAgricultureExpoGarden，Changchun130117)Abstract：ERFtranscriptionfactorfam

4、ilyisextensivelyinvolvedinthebioticandabioticresponses．TheGmERF5promoter(1924bp)wasisolatedfromsoybeangenomeusingPCR．SequenceanalysisindicatedthatGmERF5Pcontainsseveralstress—inducedelements：G—box，GT一1，LTRE一1，W—box，TL1，DPBF，MYB，MYCandBIHD10S．GmERF5PwassubelonedintopCAMBIA1301vectorto

5、drivetheGUSgenetoexpressintobaccoleavesbyAgrobacterium—mediatedinjectiontransformation．TheactivityofGmERF5PwasanalyzedusinghistochemistrystainingandGUSfluorescenceintensityanalysis．TheresultsindicatedthatGmERF5PactivatedexpressionofGUSreportgeneundernormalgrowingconditions．Theactivit

6、yofGmERF5Pwasup—regulatedafterthetreatmentsofdroughtandlowtemperaturefor10h．Keywords：SoybeanGmERF5PGUSactivityPrometerStress—induced当植物处于不利的环境中时会迅速激活相关的植物中相继获得大量ERF基因。近年来，将拟南芥信号转导途径¨，合成大量逆境相关的基囚产物，中的ERF转录因子HARDY在三叶草中异位表达，包括酶、分子伴侣、离子通道蛋白和转运体等J，降低了转基因植物的蒸腾作用和对钠离子的摄人量，使植物更好的适应各种生物和非生物胁迫

7、。其中，从而提高了转基因三叶草的抗旱性和抗盐性’。超逆境相关转录因子由于可以和启动子中特定的元件表达SIERF1的转基因番茄与野生型相比含有更高结合，通过调节自身的改变从而调控下游多个目的的相对含水量、脯氨酸含量和可溶性糖含量，提高基因的表达而在植物适应不利环境条件方面发挥重了转基因番茄的抗盐性6j。另外，将番茄中的另一要作用。乙烯响应因子(Ethylene—responsivefac．个ERF转录因子TSRFI在烟草和番茄中过表达，通tors，ERFs)是植物中特有的一类转录因子，广泛参过GCC．box激活抗病基因的表达可提高转基因植物与植物对生物和非生物胁迫

8、的应答。自Ohme．Ta