大豆GmPLP1启动子的克隆及功能分析-论文.pdf

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1、第33卷第3期大豆科学V0l_33No．32014焦6月S0YBEANSCIENCEJun．2014大豆Gm1启动子的克隆及功能分析李永光，张宇航，罗秋兰，谷翰卿，李文滨(东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室，东北农业大学农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室，黑龙江哈尔滨150030)摘要：本研究利用染色体步移法从大豆栽培品种东农L13基因组中分离得到了GmPLP1基因1．5kb的启动子片段，利用PLACE和PlantCARE在线启动子预测工具发现了107个调控元件。将该片段定向替换载体pBI121的CaMV35S组成型启动子，构建表达

2、载体pBI121．pGmPLP1，驱动下游报告基因GUS基因表达，并通过组织化学染色和GUS定量分析对预测结果进行验证，结果显示GmPLP1受黑暗、蓝光、低温、GA，和ABA诱导表达。关键词：GmPLPl启动子；GUS基因；组织化学染色；顺式调控元件中图分类号：$565．1文献标识码：ADOI：10．11861／j．issn．1000—9841．2014．03．0311CloningandFunctionalAnalysisofaPromoterofGmPLP1GeneinSoybeanLIYong—guang，ZHANGYu-hang，LU

3、OQiu—lan，GUHan-qing，LIWen—bin(KeyLaboratoryofSoybeanBiologyinChineseMinistryofEducation，KeyLaboratoryofSoybeanBiologyandBreedirIg／GeneticsofChineseAgrlcultureMinistry，NortheastAculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：Torevealthemolecularmechanismunderlyingtheexpressi

4、onofsoybeanPLP1(GmPLP1)genethatcontainsPAS／LOVdomain，its5regulatoryregionwasanalyzed．The1．5kbfragmentupstreamoftheGmPLP1genewasisolatedfromsoy—beancuhivar‘DongnongL13’bygenomewalking．Therewere107cis—actingelementsinthepromoterpredictedbyonlinesoft—warePlantCAREarmPLACE．thep

5、romoterfragmentdeletionswereinsertedintothe5regionofthegus．AreportergeneinvectorpBI121(replacingthe35Spromoter)．InordertodeterminethepromotercharacteristicofGmPLP1．TheconstructsweretransferredintoNicotianatabacumandGlycinemax．TheGUSactivitywasup—regulatedunderdark，bluelight

6、，gibberellinA3andabscisicaciddrivenbyGmPLP1promoter．Keywords：GmPLP1promoter；GUSgene；Histoehemiealstaining；Cis—regulatoryelements光是影响植物生长发育最重要的环境因子。这些结果也都表明PLPs很可能是一类新的蓝光受植物接受和传导光信号主要依赖于各种光受体蛋体蛋白_4。但是对于由于PLP的突变体没有任何白，以适应光环境的改变。迄今为止，在植物中已表型和生理活动变化，导致人们对PLP蛋白具体的经发现了红远红光受体．光敏色素

7、(phytochroIne，生理功能，生物化学活性以及与他们互作的具体蛋PHY)、蓝光／紫外光．A受体包括隐花色素(crypto—白都一无所知。chrome，CRY)和向光色素(phototropin，PHOT)、紫外本研究利用染色体步移法克隆了大豆GmPLP1光一A和紫外光一B受体(UV．Bphotoreceptors，ULI)以基因的启动子，通过启动子元件分析和转基因烟草及Zeitlupes(ZTLs)等光受体J。各种光受体能够GUS染色，初步明确了该基因启动子的启动表达特调节植物种子萌发、幼苗伸长、向光性生长、开花等点，为进一步解析大豆

8、GmPLP1基因的功能提供了生理活动。除了上述几种光受体外，植物中其他理论基础。未知的光受体也陆续被发现，PLP是一种新的蓝光1材料与方法受体候选基因。在拟南芥中存