葡萄aco1基因启动子克隆及功能分析

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1、分类号：密级：学校代码：学号：10165201111212逢掌何耗犬学硕士学位论文⑨葡萄AC01基因启动子克隆及功能分析作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：2014年03月学位论文独创性声明测N,刺26't3598本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽

2、宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：碰指导教师签名：签名日期：2Dl华年办名日辽宁师范大学硕士学位论文摘要欧洲葡萄(Vitisvinifera)果实内的糖分含量高、口感香甜，是人们酿制葡萄酒的主要原材料之

3、一，具有较高的经济价值。但其抗逆性较差，生长发育过程中易受到病虫害及环境变化等胁迫的侵害，导致其品质和产量受到严重的影响。研究表明，乙烯在植物抵抗逆境胁迫的过程中发挥着重要的作用，而在乙烯的生物合成途径中ACC氧化酶发挥了十分重要的作用，它能直接催化ACC(1．氨基环丙烷．1．羧酸)转变为乙烯，因此，研究ACC氧化酶基因表达调控的分子机制具有非常重要的意义。本实验选取欧洲葡萄中AC01基因的启动子进行克隆和功能分析，从而为葡萄抗逆性研究提供理论依据。利用普通PCR技术，从欧洲葡萄基因组DNA中克隆获得VvAC0

4、1基因启动子序列，长度为1956bp，在顺式作用元件分析网站PlantCARE中分析启动子序列中包含的元件，发现该基因启动子序列中包含多种植物逆境胁迫响应元件，如抗氧化胁迫响应元件、热击胁迫响应元件等：还包含多种植物激素响应元件，如脱落酸响应元件、生长素响应元件、赤霉素响应元件及水杨酸响应元件。根据VvAC01基因启动子中顺式作用元件的分析结果，对该启动子序列进行5’缺失片段扩增，获得了4条不同长度的VvAC01基因启动子5’缺失片段(VvAC01P1～MCDJP4)。将VvAC01基因启动子的4条5’缺失片段

5、分别替换PBl221．LUC表达载体的35S启动子序列，构建了重组的表达载体。利用PEG．Ca2+介导原生质体转化的方法，把重组表达载体转染至拟南芥原生质体中培养，通过检测LUC报告基因的表达水平，发现VvAC01基因启动子Pl～P4段均能调控下游LUC报告基因的表达，并且发现VvAC01基因启动子的．1483~-515bp区域有抑制下游基因表达的作用；．5l5～88bp区域有促进下游基因表达的作用。综上所述，本实验初步确定了VvAC01基因启动子序列中顺式作用元件的种类、数量及特性，为进一步研究VvACO基因

6、的表达调控机制提供实验数据，为提高葡萄抗逆性的研究提供理论参考。关键词：欧洲葡萄；AC01基因；启动子；瞬时表达葡萄ACOI基因启动子克隆及功能分析CloningandFunctionalAnalysisofAC01PromoterinVit&viniferaAbstractVitisvinifera，whichisoneofthemainrawmaterialsofproducingwineandhashigheconomicvalue，containshighcontentofsugarandtastess

7、weet．WhiletheresistanceofVitisviniferaiSpoorlikethediseasescausedbyinsectsandenvironmentalchangesinitswholelife，whichwillaffectitsqualityandyieldseriously．Studieshaveshownthatethyleneplaysanimportantrolesinplantresistances，andACCoxidaseisthekeyenzymeinEthyle

8、nebiosynthesis，whichcancatalyticACC(1-aminocyclopropane—l·carboxylicacid)toethylenedirectly．TheithasimportantsignificancetostudythemolecularmechanismsofexpressionandregulationofACCoxidase．Inthis