印度芥菜bjcrp1基因的启动子克隆及其功能分析

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1、万方数据分类号：$512．1单位代码：10086学号：圣Q!!窒!圣印度芥菜BjCRPl基因的启动子克隆及其功能分析CloningandFunctionalCharacterizationofBjCRPlanditsPromoterfromBrassicajunceaL．学位申请人：郭璐指导教师：刘桂茹教授郎明林副研究员学科专业：遗传学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一四年五月二十五日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也

2、不包含为获得塑兰垦盔些苤堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字同期：≯7V年占月)同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇堡盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦壅些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：签字日期：为l够年6月2同学位论文作者毕业后去向：工作单

3、位：通讯地址：导师签名：毒一7矽多∥易签字日期：矽似年6月乙R电话：邮编：万方数据本文所用缩略词及中文对照AmpAmpicillin氨苄青霉素KQAdenosinetriphosphate三磷酸腺苷BLASTBasiclocalalignmentsearchtool基本的局部序列联配搜索工具CefCefotaxime头孢噻肟C1jABCetyltriethyminetetradeticacid十六烷基三乙基溴化铵dmDeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸DMSODimethylsulphoxide二甲基亚砜EDTAEthylenediaminete

4、traaceticacid乙二胺四乙酸GSPGenespecificprimer基因特异引物1mIsopropyl--13-o-·thiogalactopyranoside异丙基．p—D硫代?卜乳糖营KanKanamycin卡那霉素LBLuria-bertanimediumLB培养基MSMurashigeandSkoogmediumMS培养基NAA1-naphthlceticacid叶萘乙酸NCBlNationalCenterforBiotechnologyInformation美国国家生物信息中心0l心Openreadingframe开放阅读框OD260Absorbanceat260mn

5、260rim处的吸光值OD280Absorbanceat280nm280rim处的吸光值PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应RifRifampicin利福平rmpRevolutionperminute每分钟转速TaqThermusaquaticusDNApolymerase栖热水生菌DNA聚合酶TBE腼s-Boricacidt汐弱bufferTris-硼酸缓冲液X-gal5-bromo·4·chloro一3--indolyl-肛D-galactoside5．溴4氯．3一吲哚．B_D一半乳糖苷昏BA6-Benzylaminopurine6-苄氨基腺嘌呤万方数据摘

6、要重金属离子对植物的生长发育的毒害作用非常明显，会改变植物的细胞结构、细胞形态、抑制植物生长、甚至导致死亡。印度芥菜对Cd、Zn等多种重金属有富集或忍耐能力，是作为植物修复技术的一种模式植物。印度芥菜可通过对重金属的螯合、区域化等多种方式解除重金属的毒性，或缓解重金属的毒害。BjCRPl基因是本实验室从CdCl2胁迫印度芥菜中克隆的核糖体相关膜蛋白RAMP4家族基因。本实验利用GenomeWalking技术获得了BjCRPl的启动子序列，通过分析启动子的顺式作用元件对BjCRPl的生物学功能进行了预测分析。同时，本研究利用农杆菌侵染法获得了BjCRPl过表达的转基因烟草植株及其To代种子。

7、通过GUS染色和重金属胁迫处理，对转基因烟草BjCRPl的组织表达部位和对不同重金属胁迫的抗性进行了初步分析。取得的实验研究如下：1．采用染色体步移技术克隆了BjCRPl的启动子。通过生物信息软件分析表明，该启动子全长733bp，含有转录调控的保守元件TATA盒和CAAT盒，此外，还含有多个与重金属响应及抗病、逆境胁迫、激素信号途径、光信号途径、发育有关的顺式作用元件。2．利用农杆菌转染技术，进行了BjCRPl向烟草的转