蒙古牛和水牛btg2启动子的克隆及功能分析

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：乏碰』：笔内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权

2、单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：＆f垒：』：￡摘要BTG2是新型细胞抗增殖因子BTG／TOB基因家族成员之一，它是由神经生长因子诱导表达产生的一种分泌蛋白，属于瞬时早期反应基因。BTG2在猪和牛中均存在品种和个体表达差异。本研究选择蒙古

3、牛和水牛BTG2启动子区进行研究，以阐明蒙古牛和水牛BTG2差异表达分子机理，获得如下结果：以蒙古牛和水牛基因组DNA为模板，分别克隆获得蒙古牛和水牛1708bp、1478bp的BTG2启动子序列。序列比对结果显示，相对于蒙古牛，水牛BTG2启动子存在269bp的缺失，生物信息学分析发现，该序列存在多个转录因子结合位点，这为后续多态性分析和功能鉴定奠定了基础。将蒙古牛和水牛BTG2启动子序列分别重组到哺乳动物表达载体pEGFP—N1中，获得瞬时表达载体pBTG2(p)．EGFP，并将它们分别导入HeLa细胞，神经生长因子诱导后，均检测到报道基因GFP表达

4、，且蒙古牛BTG2启动子转录活性高于水牛，由此推测，水牛BTG2启动子区缺失的269bp片段很可能是导致该现象的根本原因。利用qRT—PCR检测BTG2在水牛、蒙古牛肌肉组织中的实时表达状况，由此揭示BTG2启动子区269bp缺失是否影响其转录。研究结果表明，与蒙古牛相比，水牛BTG2表达明显降低，这表明缺失的269bpDNA序列很可能与BTG2启动子活性直接相关。将蒙古牛BTG2启动子区较水牛多出的269bp片段与蒙古牛核蛋白相互作用。EMSA结果表明，在DNA含量相同的条件下，随着核蛋白浓度的增加，DNA与核蛋白的结合率呈上升趋势。该研究推测，这段D

5、NA片段中可能存在与肉品质或抗寒相关的特定的顺式元件。该研究初步预测BTG2很可能是牛肉品质以及抗寒、抗旱能力的候选基因，这为BTG2的后续研究奠定了基础。关键词：蒙古牛；水牛；BTG2；电转染：qRT．PCR；EMSATheCloningandFunctionalAnalysisofBTG2PromoterRegionofMongolianCaRleandBuffaloAbstractBTG2isarecentlyidentifiedanti·proliferativegenewhichbelongstotheBTG／TOBgenefamily．Iti

6、satransientprimary．responsegeneandencodesaNGF—induciblesecretedprotein．SpeciesandindividualexpressiondifferencesOfBTG2existinpigandcattle．ToexplorethedifferencebetweengenesexpressionasaresuItofvariousmolecularmechanisminbuffaloandMongolianCattle，ourstudyfocusedonthepromoterregion

7、oftheBTG2inthesetwomammals．Ourresultsshowed：UsingtheDNAtemplatefromthebuffaloandMongolianCattle．weclonedtheP。omo‘e。陀gionoftheBTG2，Buffalo(1478bp)andMongolianCattle(1708bp)．Comparisonofthesetwosequencesshowedalackof269basepairsinthebuffalopromoterDNAsequence．Furthermore，bioinforma

8、ticanalysisrevealedmultipletranscription