大豆CYP78A5基因组织特异性启动子的克隆及表达分析-论文.pdf

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1、2014．1作物杂志Crops大豆CYP78A5基因组织特异性启动子的克隆及表达分析刘建伟陈晓峰刘广富郭宗端李新柱胡兆平张亮。(潍坊科技学院，261000，山东潍坊；山东金正大生态工程股份有限公司，276700，山东临沭国家缓控释肥工程技术研究中心，276700，山东临沭)摘要利用PCR技术从大豆中分离了终止，从而导致器官性状变小。CYP78A5基因编CYP78A5基因的启动子，序列分析结果表明，扩增码一类转录调控因子，参与调节植物种子的大小，在片段大小为1650bp，与已报道序列的相应区域同源植物种子生长发育过程中起着非常重要的作用，但性达99．2l％。

2、RT—PCR结果表明，CYP78A5在大豆目前对其上游调控序列的研究却很少。不同组织中的表达存在差异，在未成熟种子中表达本研究利用PCR技术克隆得到了大豆量较高，在茎(上胚轴与下胚轴)中有微弱表达，而CYP78A5基因的启动子片段，并将其与GUS报告基在根和花组织中不表达。将该启动子片段与GUS因融合构建重组表达载体，通过农杆菌介导法转报告基因融合，构建植物表达载体，并采用农杆菌介化烟草，对转基因烟草植株进行启动子的表达特性导法转化烟草。转基因烟草植株中GUS基因表达分析J，为进一步研究CYP78A5基因的表达调控机分析和染色结果表明，CYP78A5启动子

3、可驱动GUS制提供了实验依据。报告基因在转基因烟草茎中特异性表达，在根和叶1材料与方法器官中不表达。关键词大豆；CYP78A5启动子；组织特异表1．1材料达；GUS检测；遗传转化东北小黄豆(国家缓控释肥工程技术研究中心)、植物表达载体pCAMBIA1301S、E．coliDH5oL菌植物器官大小受基因的调控。Adamski等在株及农杆菌EHA105菌株(国家缓控释肥工程技术拟南芥突变株中发现CYP78A5基因的功能缺失会研究中心)；克隆载体pMD19．T购自宝生物工程有导致器官变小，而其过量表达则导致器官变大。对限公司；PCR产物回收试剂盒购自Omega生

4、物技术该基因进行克隆测序和结构推断，表明它属于细胞公司；PCR引物由北京三博远志有限公司合成，测色素17450氧化酶系，可通过控制细胞分裂的时间长序在大连宝生物公司完成。短而控制生长。1．2方法CYP78A5基因是编码拟南芥细胞色素P450单1．2．1RT—PCR分析用Trizol法抽提大豆根、上加氧酶的一个CYP78家族成员。这个基因在茎顶胚轴、下胚轴、花、未成熟种子等各组织RNA_6。。端分生组织的周缘区大量表达。在花器官发育时将抽提的RNA作为模板，利用TaKaRaPrimeScriptM期，CYP78A5的表达量不稳定，过表达该基因会导1stStr

5、andeDNASynthesisKit反转录试剂盒合成cD—致细胞形态多样化，从而导致茎的扭曲和花器官的NA。缺陷。CYP78A5缺失突变体klu造成花瓣、萼片、以反转录得到的eDNA产物作为模板，根据叶片和茎等地上器官发育过程中细胞有丝分裂提前CYP78A5基因的eDNA序列设计RT．PCR引物Rp-作者简介：刘建伟，助教，主要从事生物技术方面的教学与科研工作F和Rp-R，Actin基因引物为Aetin．F和Actin-R，序刘广富为通信作者，工程师，研究方向为植物学列见表1。基金项目：“十二五”国家科技支撑计划资助项目“缓控释肥产业化技术集成与示范”(

6、2011BAD11B02)；山东省自主创新专PCR反应条件：94℃预变性5min，94oC变性项“精准施肥信息化关键技术集成与示范”50s，50~C退火50s，72~C延伸1min30s，30个循环；(2012CX90202)收稿日期：2013—07—25，修回日期：2013—10—2372℃延长10min。PCR产物置于1％琼脂糖凝胶电54