大豆食心虫储存蛋白hexamerin基因的克隆与表达分析-论文.pdf

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1、应用昆虫学报ChineseJournalofAppliedEntomology2014，5l(3)：717-724．DOI：10．76790．issn．2095-1353．2014．086大豆食心虫储存蛋白hexamerin基因的克隆与表达分析冰臧振原贾宝辉李涵哲李娜孟凡立李文滨(东北农业大学农学院大豆生物学教育部重点实验室哈尔滨150030)摘要【目的】储存蛋白是昆虫发育、变态和生殖过程中氨基酸的主要来源，Hexamerin是储存蛋白家族重要成员，在昆虫的生长发育中起着重要作用。为了研究hexamerin基因(spbHex)在大豆食心虫Leguminiv

2、oraglycinivorellaMatsumurav生长发育过程中的作用，对大豆食心虫SpbHex基因进行克隆与表达分析。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆spbHex的eDNA全长序列，并通过qPCR研究其在不同发育阶段和幼虫不同组织的表达情况。【结果】SpbHex基因cDNA序列全长2161bp，其中开放阅读框2112bp，编码703个氨基酸。蛋白预测分子量84．15ku。hexamerin基因在大豆食心虫不同发育阶段和不同组织中均有表达。在不同生长发育阶段中4龄幼虫的表达量较高，1龄和成虫的表达量较低；在不同组织中脂肪体的表达量较高，表皮中

3、的表达量最低。【结论】本研究克隆了大豆食心虫储存蛋白hexamerin基因，并对其在大豆食心虫中表达模式进行分析，为进一步明确hexamerin基因在大豆食心虫生长发育中的作用奠定基础。关键词大豆食心虫，hexamerin基因，基因克隆，表达分析MolecularcloningandexpressionanalysisoftheSpbHex(hexameringene)insoybeanpodborer(LeguminivoraglycinivorellaMatsumurav)ZANGZhen-YuanJIABao-HuiLIHan—ZheLINaMENG

4、Fan—LiLIWen．Bin”(KeyLaboratoryofSoybcanBiology,MinistryofEducation，SchoolofAgriculture，NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030，China)Abstract【ObjectiveslIninsects，StorageSuperfamilyProteins(SSPs)accumulateapparentlytoserveassourcesofaminoacidsduringmetamorphosis，reproductiona

5、nddevelopment．HexamerinsareimportantSSPs．Inordertostudythefunctionofthehexameringeneinthedevelopmentofsoybeanpodborer,thegenewasclonedanditsexpressionanalyzed．【MethodsJThefulllengthoftheeDNAsequenceofthesoybcanpodborerhexameringene(SpbHex)wasamplifiedusingthereversetranscriptionpo

6、lymerasechainreaction(RT-PCR)andrapidamplificationofcDNAends(RACE)．TheexpressionofSpbHexinalldevelopmentalstagesandtissueswasanalyzedusingRealtimequantitativePCR．【Results1Asoybeanpodborergeneencodinghexamerin(SpbHex)wascloned．ThefulllengthofSpbHexwas2161bpwithanopenreadingflame(OF

7、R)of2112bp．TheORFofSpbHexencodesaproteinof703aminoacidswithapredictedmolecularmassofapproximately84．15ku．RT—PCRanalysesindicatesthatSpbHexwasexpressedinalldevelopmentstages．withthehighestexpressioninf0urthinstar·资助项目：国家自然科学青年基金(31201229)；中国博士后科学基金(2012M510914)；黑龙江省博士后基金(LBH—Zl1223

8、)；黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划项目(1253G008