大豆凝集素提取工艺研究-论文.pdf

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1、2013年第3期牡丹江师范学院学报(自然科学版)NO．3，2O13(总第84期)JournalofMuda~iangNormalUniversityTotalNO84大豆凝集素提取工艺研究李杨(绥化学院食品与制药工程学院，黑龙江绥化152006)摘要：以大豆为原料，对大豆植物凝集素提取工艺条件进行研究，正交试验优化出的最佳提取工艺条件为：超声功率400w，超声时间40min，硫酸铵饱和度为6O，pH值为5．5．关键词：大豆凝集素；提取；凝集效果[中图分类号]069[文献标志码]A[文章编号]1003—6180(2013)03—0028—03大豆凝集

2、素(SBA)口是抗营养因子之一，广心混匀后置4℃冰箱保存备用．泛存在于豆科植物中，是一种非免疫原，能凝集细第三步，血凝效果测定．取用Alsevers液保胞或沉淀含糖高分子蛋白质或糖蛋白．SBA含量存的新鲜O型血5mL，加入0．85氯化钠溶液是评价饲料品质的重要指标．SBA约占大豆蛋白8mL，缓慢混匀，1000r／min离心5min，弃去上质总量的10，采食过量时动物表现为增重减清液，如此重复操作洗涤3～5次，上清液颜色近少，饲料利用率下降，影响免疫系统功能．[2本实乎透明，离心出的红细胞配成1O的红细胞悬验对大豆植物凝集素提取工艺条件进行研究，以液

3、，4℃冰箱中保存备用．指导生产实践．第四步，采用试管法观察凝集反应．将上述已1材料与方法经过恒重处理的试管轻轻混匀，37℃下培养1．5h，肉眼观察血凝程度．然后以2000r／min1．1材料与试剂离心，弃去上清液，将装有血凝细胞的试管置于恒材料大豆，绥化市庆安县生产；新鲜人血(0温干燥箱中，105℃下干燥至恒重，冷却、称重，得型)，采于绥化市第一医院．干质量，以其多少评价血凝程度的高低L5]试剂凝集素标准品，Signa公司生产；自配大豆凝集素提取工艺单因素试验选取超声Alsevers液，红细胞悬浮液；试剂均为分析纯．时间、超声功率、硫酸铵饱和度、p

4、H值四个因素1．2仪器与设备进行单因素试验．按表1条件试验，A代表超声KQ一500VDE型双频数控超声波清洗器(昆功率，B代表超声时间，C代表硫酸铵饱和度，D山市超声仪器有限公司)；TDL80-2B离心机(上代表PH值(以下同)．海安亭科学仪器厂)；电热恒温鼓风干燥箱DHG表1单因素及水平汇总表一9123A(上海恒科学仪器有限公司)；透析袋(组别A／wB／minC／D美国UninaCarbid公司)．20030250401．3实验方法30050SBA的提取将大豆粉碎均匀后，按一定的35O60料液比加入提取剂，经超声波处理，离心10min，40070

5、4508O取上清液保存于4℃冰箱中，备用．血凝效果测定第一步，制备Alsevers液．取葡萄糖2．O5g，柠檬酸钠0．89g，柠檬酸0．05g，氯正交实验确定提取工艺最佳条件根据单因化钠0．42g，蒸馏水i00mL，调pH值至7．2．过素实验的结果，选取对大豆凝集素提取效果有影滤，高压灭菌10min，置4℃冰箱保存备用．响的因素水平，以血凝干重值为评价指标，用正交第二步，制备红细胞悬浮液．取新鲜O型人设计法进行实验，工艺流程同提取纯化单因素试血5mL，转移至盛有20mLAlsevers液瓶中，小验工艺流程，得出血凝效果的最佳提取条件．收稿日期：20

6、13-02—12·28·2013年第3期牡丹江师范学院学报(自然科学版)No．3，2O13(总第84期)JournalofMuda~iangNormatUniversityTotalNO842结果与分析1盈{2．1单因素试验结果园馨超声功率对提取效果有影响，不同功率与血焉}凝集细胞团干重的关系见图1．选取超声功率300崮W，350W，400W，450W四个水平做正交实验．涮pH值暖图4pH与干重的关系霉器捌《2．2正交试验结果薅以血凝反应凝血干重值为考察指标进行正交实验．结果见表2．2uU250j删350400450表2LI6(45)正交实验结果超

7、声功率／W图1超声功率与干重的关系超声时间对提取效果有影响，超声时间和血凝集细胞团干重的关系见图2．选取20rain，30rain，40rain，50rain四个水平做正交实验．n0060．0050．004罂0．003暴媒0．002誉noo1OlU2UjU40，U60超声时间／mha图2超声时间与干重的关系硫酸铵饱和度对提取效果有影响，硫酸铵饱和度和血凝集细胞团干重的关系见图3．由图3可知，随着硫酸铵饱和度的增加，凝集素的溶解度逐渐减少，斥出的沉淀的位置逐渐上升．选取硫酸铵饱和度50，60，70，80四个水平做正交实验．恻蔑禽暴表2的数据表明，各因

8、素对实验结果影响的鲁大小顺序为因素顺序为A>C3>D>B，即超声功3040，U6070U率>硫酸铵饱和度>pH值>超声时间