海带凝集素提取工艺研究.pdf

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1、第33卷第5期水产科学Vo1．33NO．52014年5月FISHERIESSCIENCEMay2014海带凝集素提取工艺研究李丹彤，李悦，尹建鹏，李帅，李晓丽(大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连116023)摘要：为探究海带凝集素最佳提取方案，分别对pH、料液比、浸泡时间、烘干温度4种单因素对海带凝集素提取的影响进行研究，缓冲液选取PBS、TBS和甘氨酸，料液比选取6个梯度(1：5～l：30)，浸泡时间选取6个梯度(5~30h)，烘干温度选取9个梯度(30～l1O℃)，采取控制其中3个因素条件不变的方法，得到每个因

2、素的最佳提取效果。其单因素最佳效果是pH缓冲液为TBS7．7，料液比1：3O，浸泡时间15h和烘干温度4O、6O℃。然后由各单因素中选出提取的最适条件及与最适条件相临的2个水平(共3个水平)进行四因素三水平的正交试验，根据正交试验极差分析法对正交试验数据进行分析，温度为50℃、缓冲液为TBSpH7．7、料液比为1：20、浸泡时间为2oh的组合对海带凝集素提取效果最好。从而得出一种提取海带凝集素最优的组合，使提取工艺得到优化。为海带凝集素的研究提供了理论基础。关键词：海带，凝集素，提取工艺中图分类号：TS254．58文献标识码：A文章

3、编号：1003一i111(2014)05—0296-05凝集素是一类具有糖专一性，可促使细胞凝集于海带凝集素的研究较少，因此海带凝集素的提取的蛋白质或糖蛋白，其具有凝集细胞，抑制肿瘤细工艺对于研究其分离纯化及生物活性是一个关键胞增殖，抑制血小板凝集等多种生物活性[1]。的问题。本研究以海带为研究对象，在4个单因素海带(Laminariajaponica)属褐藻门、海带科、中分别选出最适条件及相临2个条件，根据正交试海带属，又名昆布；它具有分布广、藻体大、生长快验极差分析法对正交试验数据进行分析，从而得出等特点，有研究报道，海带中含有

4、6O多种营养成对海带凝集素提取效果最好的组合。分，是典型的低热量、中蛋白、高矿物质的天然保健1材料与方法食品。关于褐藻门中的海藻，对其中的裙带菜(Undaria1．1材料pinnatifida)[3]和海带[4]凝集素的分离及部分性质已海带购自大连市黑石礁农贸市场，海带长约有研究。而对其他藻类，如海洋红藻(Tichocarpus1．9m，试验兔购自大连医科大学实验动物中心。crinitus)[5]、孑L石莼(Ulvapertusa)[6]、肠浒苔(Enter—1．2方法omorphaintestinalis)ET]、隅江蓠(Grac

5、ilariacorne—1．2．1蛋白质含量测定a)[、角又菜(Chondrusocellatus)[、海萝(Gloiopehis采用紫外吸收法测定，用A。表示。furcata)L1叩等进行了分离纯化。1．2．2兔血红细胞悬浮液的制备提取工业是近年来新兴的一种试验技术，目前取新鲜兔血用生理盐水洗4次(4000r／min，已经应用于许多物质，如黄酮类物质[11-12]、虾青10rain)，每次弃上清液，用生理盐水配制成2的素m]、多糖类m。等，关于凝集素的提取工艺，已有红细胞悬浮液。对槲寄生(Viscumcoloratum)[1引、韭

6、菜(Alliumtu—1．2．3血凝活性的测定berosum)、自桦茸(PhaeoporusobliquU5)引、桑用生理盐水将凝集素溶液进行等量倍比稀释，叶(Morusalba)[1、大豆(Glycine~?lax)叩及绿豆在96孔V形血凝板上滴入4O“L凝集素溶液后，(Mungbean)[2妇等凝集素的研究。由于国内外对加入2的红细胞悬液40L，震荡摇匀，室温放置收稿日期：2O13—10—16；修回日期：2013-12—23．基金项目：辽宁省教育厅团队资助项目(2008T021)．作者简介：李丹彤(1965一)，女，教授，硕士；

7、研究方向：海洋生物技术．E—mail：lidantong@dlou．edu．cn第5期李丹彤等：海带凝集素提取工艺研究2h，肉眼观察。当红细胞沉积在V型孔底部呈大2结果红点状，说明无凝集现象。若有凝集现象则呈网状不下沉，血凝活力以产生凝集现象时凝集素最大稀2．1影响海带凝集素提取的单因素研究结果释倍数表示(或对数值log)。2．I．1不同缓冲液对海带凝集素凝集活性的影响1．2．4样品制备(1)不同pH的PBS缓冲液对海带凝集素凝集将购回的海带立即用过滤海水洗净，用纱布及活性的影响滤纸吸去水分，称取新鲜海带50g，放入保鲜薄膜用pH为

8、5．8、6．2、7．2、8．0的PBS缓冲液，取袋中，共1O份(1袋作为备用)，放入冰箱一20℃冷3O℃烘干的海带粉浸泡16h，提取上清液，测定凝冻，再于不同温度下烘干，研成粉末备用。集素凝集活性。结果显示，pH8．0时，凝集素凝集1