DDP的建立及其耐药机制研究.pdf

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1、浙江临床医学2013年6月第15卷第6期·779·胃癌耐药细胞株SGC790删建立及其耐药机制研究栾俊伟董晓强【摘要】目的建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901／DDP，并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法采用逐步递增顺铂浓度持续作用法诱导获得SGC7901／DDP，采用CCK一8法检测药物敏感性，并计算半数抑制浓(IC50)和耐药指数RI，流式细胞仪分析细胞周期分布与细胞内罗丹明123积累量；采用实时荧光定量PCR检测耐药相关基因MDR．1、MRP．1、MRP．2、MRP．3、MRP一5、ERCC1、Survivin的mRNA表达，及凋亡相关基因Bax、Casp

2、ase-3、Bcl-2的mRNA的表达。用Westernblotting法检测耐药胃癌细胞株SGC7901／DDP与其亲代药物敏感胃癌细胞株SGC7901凋亡相关蛋白Survivin及耐药相关蛋白P一糖蛋白的表达。结果成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901／DDP，对顺铂的耐药指数为9．86，并对盐酸阿霉素，氟尿嘧啶交叉耐药，SGC7901／DDP细胞与亲本细胞SGC7901相比，生长缓慢，倍增时间延长，细胞周期分析发现s期细胞减少，G1、G2期细胞增多，细胞蓄积罗丹明123~,力下降，MDR．1、MRP．1、MI．2、MI．3、MRP．5、ERCC1、Survivin、Bc1．2表达升

3、高，细胞凋亡相关基因Bax、Caspase．3表达下降，Survivin、P．糖蛋白上升。结论耐药机制可能与MDR．1、MRP．1、MRP．2、MRP．3、MRP．5、ERCC1、Survivin、Bc1．2的表达上调和Bax、Caspase．3表达下调有关，以及Survivin与P．糖蛋白表达上调，提示多种耐药机制参与顺铂引起的胃癌细胞耐药。【关键词】胃癌顺铂多药耐药耐药相关基因【Abstract】ObjectiveTheaimofthisstudywastoestablishamultidrug—resistantcelllineSGC·7901／DDPtoexploreitsmo

4、lecularmechanismoftheMDR．andbiologicalcharacteristics．MethodsByculturingwithcontinuesandintermittentgradualincreasing-concentrationofDDP．ahumangastriccancermultidrug—resistantcellline-SGC7901／DDPwasestablished．ThechemoresistanceindexesofcellswereevaluatedbyCCK一8assays．afteradriamycinwasaddedinan

5、dIC50andresistantfactorwerecalculated．ThedistributionofthecellcycleandintracellularaccumulationofRhodamine123wereassayedwithflowcytometry．ThegeneexpressionofMDR-1、MRP一1、MRP一2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2、Bax，Caspase一3wasevaluatedbyRealtimeQuantitativePCR．Theexpressionofapoptosisassociatedpro

6、teinssurvivinanddrugresistance—associatedproteinP—gPweredeterminedwithWesternblotanalysis．ResultsByculturingwithcontinuesandintermittentgradualincreasing-concentrationofDDP丘ersixmonths，TheresistanceindexofSGC7901／DDPtoDDPwas9．86timeshigherthanthatofSGC7901andthecellsshowedresistanttoADMand5-FUin

7、coordinately．CellcycleanalysisshowedasignificantdecreaseinSphaseandaremarkableincreaseinGi／G0fraction．TheRealtimeQuantitativePCRresultdemonstratedthatmRNAlevelsofMDR一1、MRP-1、MRP一2MRP一3MRP5ERCC1SurvivinBc1．2inthecellsofSGC．79