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1、医药导报2014年9月第33卷第9期·1121··药物研究·替莫唑胺耐药人脑胶质瘤细胞系*U251/TR建立及耐药机制12345潘强,杨学军,高松,纪延伟,张文高(1.山东省莱芜市人民医院、泰山医学院附属莱芜医院神经外科,莱芜摇271100;2.天津医科大学总医院神经外科,天津摇300052;3.天津医科大学附属肿瘤医院胰腺肿瘤科,天津摇300060;4.山东省交通医院神经外科,济南摇250031;5.河北省沧州市中心医院神经外科,沧州摇061001)摘摇要摇目的摇建立替莫唑胺耐药人脑胶质瘤细胞系,探讨
2、其耐药机制,以期为临床优化药物化疗方案提供参考。方法摇通过体外分步诱导方法使人U251胶质瘤细胞对替莫唑胺产生耐药,噻唑蓝比色法检测耐药指数及细胞存活率;6采用Western鄄Blot、逆转录鄄聚合酶链免疫(RT鄄PCR)、免疫荧光、免疫组化法检测O鄄甲基鸟嘌呤鄄DNA甲基转移酶(MGMT)表达变化,分析细胞耐药机制。结果摇历经8个月成功建立了对替莫唑胺耐药的胶质瘤细胞U251/TR,在替莫-1-1唑胺初始浓度为0.25滋g·mL,终浓度为16.00滋g·mL培养液中,U251/TR细胞半数抑制浓度(I
3、C)为未经诱导的50U251胶质瘤细胞的7倍(P=0.00),其耐药指数约为7.00;U251/TR细胞MGMT表达水平较未经诱导的U251胶质瘤细胞明显增加(P=0.00)。结论摇通过分步诱导方法于体外成功建立1株对替莫唑胺耐药的U251/TR细胞系。MGMT表达水平升高是导致U251/TR细胞对替莫唑胺耐药的主要机制。6关键词摇替莫唑胺;神经胶质瘤;O鄄甲基鸟嘌呤鄄DNA甲基转移酶;抗药性中图分类号摇R979.1;R969摇摇摇文献标识码摇A摇摇摇文章编号摇1004-0781(2014)09-112
4、1-05EstablishmentofaTMZ鄄resistantHumanGliomaCellLineU251/TRandtheMechanismofDrug鄄resistance12345PANQiang,YANGXue鄄jun,GaoSong,JIYan鄄wei,ZHANGWen鄄gao(1.DepartmentofNeurosurgery,People'sHospitalofLaiwuCity,LaiwuHospitalAffilliatedtoTaishanMedicalCollege,Lai
5、wu271100,China;2.DepartmentofNeurosurgery,TianjinMedicalUniversityGeneralHospital,Tianjin300052,China;3.DepartmentofPancreaticNeoplasms,CancerHospital,TianjinMedicalUniversity,Tianjin300060,China;4.DepartmentofNeurosurgery,ShandongJiaotongHospital,Jinan2
6、50031,China;5.DepartmentofNeurosurgery,CangzhouCentralHospitalofHebeiProvince,Cangzhou061001,China)ABSTRACT摇Objective摇Toestablishadrug鄄resistancecelllineofhumangliomawithtemozolomide(TMZ),investigateitsresistancemechanisms,andprovideexperimentalevidencef
7、oroptimalTMZtherapy.摇Methods摇ATMZ鄄resistanthumangliomacellline,U251/TR,wasestablishedbystepwiseexposureofhumanparentalU251cellstoTMZ.ResistanceindexandcellviabilitywereaccessedbyMTTassay.Western鄄Blot,RT鄄PCR,immunohistochemistryandimmunofluorescencewereus
8、edtodetectMGMTexpressionfortheanalysisofresistancemechanism.摇Results摇ATMZ鄄resistanthumangliomacellline,U251/TR,was-1developedafter8monthsofstepwiseinductionwith0.25-16.00滋g·mLTMZ.ICinU251/TRcellswasapproximately750timeshig
