人紫杉醇耐药细胞株LoVoTAX的建立及其耐药机制研究

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1、人紫杉醇耐药细胞株LoVo/TAX的建立及其耐药机制研究郭嘉义陈一帆李云鸿张敏张燕黄卫东宁夏医学科学研究所宁夏医科大学基础医学院摘要:目的:以体外建立的人结肠癌紫杉醇(paclitaxel,TAX)耐药细胞株LoVo/TAX为模型,探讨结肠癌紫杉醇获得性耐药潜在的分子机制。方法:对LoVo亲本细胞及LoVo/TAX耐药细胞进行对比分析,采用光镜及透射电镜观察细胞形态,MTT法检测细胞药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR方法和Westernblol方法分别检测多药耐药相关基因、微管蛋白相关基因以及

2、凋亡和细胞周期调控相关基因的转录和翻译水平。结果:与亲本细胞相比,LoVo/TAX对紫杉醇高度耐药,细胞形态也有明显变化,其5/M期阻滞降低(P<0.05),凋亡率显著下降(P〈0・01),MRP、MAP-Tau和CDK1基因表达水平提高(P<0.05)。结论:多药耐药相关蛋白IRP1、微管相关蛋白MAP-Tau以及细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)过表达可能是引起结肠癌细胞对紫杉醇耐药的主要原因。关键词:结肠癌细胞;紫杉醇耐药;MRP1;MAP-Tau;CDK1;作者简介:郭嘉义(1963-),男,安徽人,研究员,主要从事肿

3、瘤药物基因组学研究。E-mail:jyguo@hotmail.com作者简介:黄卫东(1969-),女,河南人,教授,硕士生导师,主要从事细菌感染及耐药性的分子机制研究。收稿日期:2017-05-26基金:宁夏高等学校科学硏究项目(编号:NGY2012052)Establishmentofpaditaxel-resistantcoloncancercelllineLoVo/TAXanditsdrug-resistancemechanismsGuoJiayiChenYifanLiYunhongZhangMinZhangYanHuan

4、gWeidongNingxiaInstituteofMedicalSciences;BasicMedicalCollege,NingxiaMedicalUniversity;Abstract:Objective:ToexplorethepotentialmolecularmechanismofpaditaxelresistaneeincoloncancerwithTaxol-resistantcoloncancerLoVo/TAXcelllinecomparewithitsparentalcellLoVo.Methods:Them

5、orphologicalfeatureswereobservedbyinvertedmicroscopeandtransmissionelectronmicroscope,drugresistanceofLoVoandLoVo/TAXwasdeterminedusinganMTTassay,cel1cycleanalysisandapoptosisweredeterminedbyflowcytometry,themRNAlevelsofMdrl,Mrpl,GST-n,LRP,TopoII,TUBB3,Cdkl,MAP-Tau,Bc

6、l-2,TP53wereassessedbyrealtimequantitativePCR,theproteinexpressionlevelofMRP1,Bcl-2,TUBB3,CdklandMAP-TauweredetectedbyWesternblot.ResuIts:TheresistanceofLoVo/TAXcellstoTaxolwas42.32-foldthanthatoftheoriginalLoVocells.Ttalsoexhibitedhigh-levelcross-resistaneetoAdriamyc

7、in(ADM)and5-fluorouracil(5-FU)•TheproportionofcellsinG2/Mphasedecreasedsignificantly(P〈0.05)andtheapoptosisrateofLoVo/TAXcellswasalsodecreasedsignificantly(P〈0.01)thanthatofLoVocellsaftertreatedwith1.5Pmol/LTaxolfor24h.OverexpressionofMRP1,MAP-TauandCDK1wasassociatedw

8、iththedevelopmentofdrugresistaneeinLoVo/TAX.Conclusion:Ovcrcxprcssionofthemultidrugresistance-associatedproteinMRP1,microtub

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