商洛野生蕙兰基因组DNA提取方法的比较-论文.pdf

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1、渺江雇矸学20l4年第1期困文献著录格式：李小玲，华智锐．商洛野生蕙兰基因组DNA提取方法的比较[J]．浙江农业科学，2014(1)：73—76商洛野生蕙兰基因组DNA提取方法的比较李小玲，华智锐(商洛学院生物医药工程系，陕西商洛726000)摘要：为探讨野生蕙兰基因组DNA最佳提取方法，本研究以商洛野生蕙兰幼嫩叶片为材料，采用SDS、CTAB、高盐CTAB法提取商洛野生蕙兰的基因组DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA进行完整性检测，用紫外分光光度法对DNA进行纯度、浓度和提取率检测。结果表明，3种方法所

2、提DNA的浓度分别为2223，2980和3371Ixg·mL‘。，提取率分别为222．3，298．0和337．1Ixg·g‘。，D26。／D2g0分别为1．583，1．672和1．967，高盐CTAB所提取DNA的D。／D比值1．8—2．0，浓度、纯度及提取率均最高，电泳条带清晰，由此初步确定3种方法中高盐CTAB法为商洛野生蕙兰基因组DNA最佳提取方法。关键词：野生蕙兰；基因组DNA；提取方法；比较中图分类号：S682．31文献标志码：A文章编号：0528．9017(2014)01．0073．-03蕙兰(Cy

3、mbidiumfaberi)为兰科兰属的地生电泳槽、凝胶成像系统等。草本植物。蕙兰是我国珍稀物种，为国家二级重点主要试剂：SDS(十二烷基磺酸钠)、CTAB保护野生物种。蕙兰原分布于秦岭以南、南岭以北(十二烷基溴化氨)、EDTA(乙二胺四乙酸)、氯及西南广大地区，是比较耐寒的兰花品种之一。在化钠、一巯基乙醇、氯仿／异戊醇、异丙醇、RNase秦巴山区不少地方均有分布，商洛一带兰花的分布A、Tris—HC1、醋酸钾、琼脂糖、溴酚蓝、Marker也很广泛，其中就有蕙兰。DL2000、蔗糖、硼酸、无水乙醇等。DNA是分

4、子研究的基础物质，其提取技术则1．3溶液配制成为分子生物学的基本技术¨。DNA的浓度，尤1．3．11mol·L～Tris—HC1溶液(pH值8．0)其是DNA的纯度严重影响后续基因组酶切等结将12．11gTris碱溶于80mL超纯水中，待溶果。由于蕙兰花朵中的酚类、多糖类物质含量液冷却至室温后，用浓盐酸调定pH值至8．0，定较高，所以从叶片中提取出高质量的DNA样本有容至100mL后，分装、高压灭菌，室温保存备用。一定的难度，其提取方法的确定及优化需要不断摸1．3．20．5mol·LEDTA溶液(pH值8．0)

5、索。本研究选取SDS法、CTAB法、高盐将18．61gEDTA—Na：·HO溶于80mL超纯水CTAB法3种DNA提取方法，旨在通过对商洛中，用固体氢氧化钠调节溶液的pH值至8．o，定野生蕙兰叶片基因组DNA提取效果进行比较，探容至100mL，分装后高压灭菌，室温保存备用。讨适合蕙兰基因组DNA的提取方法，为兰花分子1．3．35tool·LNaC1溶液生物学的研究奠定基础。将29．22gNaC1溶于8OmL超纯水中，定容至100mL，分装后高压灭菌，室温保存备用。1材料与方法1．3．450％PVP溶液1．1材料

6、预处理25gPVP(相对分子质量10000)溶于80mL野外采集商洛野生蕙兰幼嫩叶片，蒸馏水洗去超纯水中，定容至100mL，高压灭菌，室温保存尘土，晾干，放入一20℃冰箱预冷备用。备用。1．2仪器与试剂1．3．510×CTAB抽提液主要仪器：人工气候箱、超低温冰箱、制冰将14mL5mol·LNaC1与66mL超纯水混机、紫外分光光度计、电子天平、高压灭菌锅、超合，在加热和搅拌下缓慢加入10gCTAB。可加热纯水仪、移液器、核酸电泳仪、恒温水浴锅、水平至65cI=，使之溶解，定容至100mL，室温保存收稿日期：2

7、013-08-19作者简介：李小玲(1980一)，女，陕西蓝田人，讲师，硕士，主要从事植物生物技术研究工作。E-mail：huazhirui2080@21el1．corn。困澎江雇J-：种学2014年第1期备用。1．4DNA提取方法1．3．63tool·L乙酸钠溶液(pH值5．2)1．4．1SDS法’40mL去离子水中加40．81g三水合乙酸钠，称取0．2g样本用液氮研磨成粉，加入1mL提用冰醋酸调pH值至5．2，再加稀醋酸定容100mL，取液(500mmo]·L～NaC1，50mmo]·L～Tris—高温灭菌

8、，室温保存备用。HC1pH值8．0，50mmol·L～EDTA，2％卢一巯基乙1．3．710g·LRNaseA溶液醇)室温数分钟解冻后，加入0．5mLlO％SDS溶取RNaseA100mg、1tool·L～Tris—HCI(pH液，轻轻混匀，于65℃保温30rain；取出后立即值7．5)0．1mL、5tool·L～NaC12．8mL、超纯水置于冰上，加0．24mL5mol·LKAe溶液